急求！小鼠间充质干细胞组织消化问题

zhouyonhzhan

想问一下想培养小鼠的脂肪间充质干细胞sigma公司的1型胶原酶怎么配？用什么溶液？

swtarron

请详细阅读胶原酶说明书，可以用你培养细胞的培养基配置。

xieyun20052005

Usually, solutions are prepared at 1-2 mg/ml in TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH7.4 at 37C.)

wzm123hzy

我配的时候查资料有用PBS配的，有用基础培养基配的。（DF-12,或者DMEM低糖）我觉得后者更可靠。7 n3 ], F. d, z9 u
配制消化时0.1%的胶原酶即可。
3 y9 C! G3 R  N. ^2 a配制时，你可以计算一下你大约消化的组织量，一只大鼠大约30ml左右。
% j! [7 c9 }' e1 K. v/ I) l以30ml  0.1%胶原酶配制为例：9 _/ t# H$ H, g. }
称取30mg 胶原酶于50ml离心管中，加入30ml基础培养基，用枪头吹打混匀（胶原酶比胰酶好溶解，枪头吹打即可）。0.22μm的滤膜过滤于洁净的50ml离心管。短时间4°保存，长时间就放在-20度。
* v% c6 w  G9 s' k) U8 k希望可以帮到你

zhouyonhzhan

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7 L; f9 A* N3 \
您是取得那个部位的脂肪?一只大鼠取得脂肪重量是多少？每只大鼠30ml胶原酶是不是太大？我预实验测了一下一只小鼠的附睾肝脂肪也就30mg加2-3ml胶原酶应该够了吧# T& Y8 @" w+ `8 z8 D! v& W

wzm123hzy

我取得是大鼠是8周的，取得大鼠附睾旁脂肪和腹股沟处的脂肪，用了差不多20 ml 吧。

wzm123hzy

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" ^8 i" }' H, y8 m3 E
我后来总结了一下，感觉6周的大鼠最合适。8周略成熟

wzm123hzy

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7 \8 d: Z' B8 M6 ?1 F6 {& K4 K# o; ^, V2 t

- M7 [, G( m5 `我取得是大鼠是8周的，取得大鼠附睾旁脂肪和腹股沟处的脂肪，用了差不多20 ml 吧。

pcljsw2008

我使用生理盐水配的，效果也不错啊，你们都弄这么高级的，是棕色溶液吧