大鼠BMSC，这个原代的形态如何？

whyme705

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0 _; g2 F- L7 Q9 A# A& h
. m5 L" d8 X+ V  ^* Z密度的话 我没有计数 就图里看来 这个密度算稀吗？

whyme705

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; d# t* G+ z; ^& y
& x  O2 V# W& Z  I2 U啊，我还看到好多人说80%就该传了……8 a( Q% g; s. F# H& i& X
可能我养BMSC还不是很熟，我感觉原代的细胞分布均匀程度不好控制，而且有时候密集处长到80-90%的时候有的细胞就有老化的迹象了，稀的还是很稀，再传代也救不回来了啊。0 H7 x  q4 o  |; M
勤换液的话，能够防止老化的发生吗？

fm001982

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9 k3 ?& L0 F) I* {- o: x7 c2 G
+ _; O7 e; z- y$ ?% d1 p你是在校学生？有时间多看书，感觉你很多细胞培养的基础知识比较匮乏。8 S0 ?* R8 {+ Z" C+ Q
1 ]8 z- v( e; L- [" H$ B3 I, S3 Q! n
一般细胞长满一块培养瓶，可以按1:3的比例传到另一个瓶，如T25传T75。( m* I" j# I$ T/ |$ _. }
你的细胞状态不好，更要计数，按8000-10000每平方厘米传。0 X  v: R! j7 Q5 v0 u7 m

2 V% _6 `8 [8 a- P- F5 X7 o# Z还有就是，细胞密度低了更容易老化，而且老化的细胞注定老化终生了。

lgfffancy

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- ~6 ]% [$ E/ `$ R+ n
; v2 g/ [" n# b0 ~7 j这个 很简单，传代的时候，吹成单细胞 悬液
$ V. M1 L9 T6 i- ^然后小心平放于培养箱中就行了。& f. Y6 n2 n! L
经验之谈。

xulu921

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. i* }: e) D. c! o& a
0 P. @5 f2 ^" w! q3 E- A8 e5 ^% |: {你好，我也是MSC培养的新手，我想知道你是怎么判断细胞老化的呢？每次师姐说我的细胞老化了不能用了，我都不知道她是怎么判断的，望大神指教

fm001982

回复 xulu921 的帖子% v. {1 |; A) z( ]3 L

& |$ T; C; E" ]* \' R! u& Y你可以问下你的师姐，她的判定标准是什么，大家也好共同交流学习。
3 c, \) F6 `0 y/ U* K& W( Q( c- J0 f2 g1 ?! k6 O
MSC是呈漩涡状生长的，老化细胞可能漩涡状不明显；
0 l: l' D9 n' \老化细胞折光度下降，也就是立体感逐渐消失；
5 ]( y1 `& l  _+ YMSC正常形态是呈梭状的，边缘比较光滑，老化细胞形态不统一，有的开始肥大，有的出现空泡，细胞边缘突出部分明显增多，甚至呈锯齿状。$ W; E, O! k4 e2 O5 o
老化细胞可能增殖能力下降，不过我的老化细胞增值能力还行。
3 q7 T+ _1 U, g6 b据说老化细胞的CD分子标志物正常，不过我还没做过流式。  H! b) e- A% a) R6 @& o6 b& g7 N
最后，细胞观察的结果应该是大部分的细胞状况，少数细胞出现异常并不能代表什么。5 i  W8 c6 O2 e! W6 J) I+ A, T
这是我个人的经验，仅供参考。
& {6 H. m3 j3 K

蚂蚁上树

应该是接种密度太低了，细胞生长需要一定的细胞分泌的一些因子成分，密度太低的话，那些因子含量太少，不利于生长。

xulu921

回复 fm001982 的帖子0 \4 a# B, x& q+ @" Z+ R

) @  ?5 A, m, ^2 Q# y7 R6 [3 f9 D: l$ L, S非常感谢你分享的经验，回头问问师姐她是怎么判断的再来分享给大家

蓝林冰泽whac

我前段时间也养了和你同样的细胞，看你原代细胞的形态挺好的啊，传代应该是没有问题的哇，我传代是用的GIBCO的胰酶替代物，消化2分钟的样子，具体要看细胞有没有边缘，回缩，还有最重要的是传代时接种密度应该要高一点，特别是前面几代，我看你传代后细胞密度太少，这样细胞也不容易长，并且特别容易老化

一僧化画

# K4 F  A* O% ^' ^$ Z! s原代细胞感觉还行。1 C+ ^# w4 Y7 O6 q) d: h0 e8 n- \7 o. u9 ^) l1 \
消化有问题。一般用0.125%胰酶消化一分钟左右就行了，边观察边消化，时间并不是固定的，要自己把握。用0.25%胰酶不好掌握时间，不推荐使用。: [: ]9 w& b( o1 G0 X" f5 Z7 U6 V: H; X- H9 ^/ A
你的原代细胞本来数量有限，还用0.25%胰酶消化2分钟，酶浓度高，时间长，应该就是消化出的问题