如何做好细胞爬片的问题

shuha

细胞爬片可以买专门的爬片，几块钱一小包的，爬片用前泡酸，高压消毒（包括镊子和枪头）。把用过的24孔板清洗干净，一孔一片，很方便，又互不干扰。把细胞培养到对数生长期，消化后再滴上去，爬1-2天贴壁后（中间可加适量培养液），可在板子里一直做完。清洗时，将PBS滴在片子上即可，不要剧烈摇晃。需要照相时候，再取出来，细胞面贴在载波片上，最好用50%甘油，中性树脂贴不好，容易毁坏细胞形态。取爬片时候，可以用枪头和镊子，或者用以下战友的方法。
, {  ^7 k! }* X3 _& W# X6 S
; a. O" ~6 G- y7 @# R* q9 Qquhualing战友问：
2 e. X, C7 }; f
- U: u3 h! @( p# t" d8 C4 w我是用293t细胞做细胞免疫组化，我们这里叫8-ohDG，我们是在24孔板做的，小片子处理好之后放到孔里，紫外线照1小时，之后就可以铺细胞了，我最大的问题是细胞培养24小时之后，镜下看挺好，但只要一洗细胞就会掉很多，几乎剩下的很少，还有一个问题最后一步染色一般要多长时间，我们有时不到一分钟染色就很重，请帮忙解答一下，谢谢。
/ C& Y$ M; \3 Z7 X' J; X* h: ]
2 q' ~5 E* D6 D9 m8 Y用什麽固定液，我们用丙酮，是不是固定液也很关键呀，我们固定10分钟 & u% |& S! x1 V- D0 x
3 D4 ^. ^- L3 e% }# Z4 \0 H
答：小片子处理好之后放到孔里，紫外线照1小时，高压消毒后的小片子，不用再照了4 U1 y) L, C: V/ v4 b8 }% {

' }& [; Z. H4 \细胞培养24小时之后，镜下看挺好，但只要一洗细胞就会掉很多，几乎剩下的很少，
2 f  b9 u& F) Z+ [. s; T' B. M! q- I4 ^9 n" d
贴壁时间可以延长，洗时候把PBS轻轻滴在片子上，不要摇。
  n% F# d! q9 H: G3 K( M' t
: \% a4 y/ I, v) w2 u) o: O8 t5 F一步染色一般要多长时间，我们有时不到一分钟染色就很重，% n1 B. {6 |# F% U

4 r4 ^/ i7 l' e2 m: O; {染色时间镜下观察确定，如果染色就很重，适当降低抗体浓度。 $ {4 Z9 P1 k& b! `
& P1 D* s: R+ m! _; C' k
玻璃片用冷丙酮(-20度)10-15分钟，可以的，如果放在24孔板里做，最好用甲醛，丙酮会腐蚀有机塑料的。

zpzp0312

谢谢分享！~~~

carfan

现在有密封的洁净24孔板的圆形盖玻片，洒在小蓝口瓶中，高压烘干即可用，节省大量时间劳力。清洗时细胞脱落和细胞是否贴玻璃壁，受到的处理因素等都有关系，得自己摸条件，不行就盖玻片上涂赖氨酸等促进贴壁的物质，细胞接种密度大些，洗脱时不震荡，二抗减低浓度或用直接法的荧光一抗。取片子时可以用大注射器针头尖部掰弯成小钩，使用非常方便。