如何养好人的胚胎干细胞

吃呆猫

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3 a7 I! c* A( q( q1 f! V
+ }7 ~$ t+ g+ c知道原因了，谢谢

573639471

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1 O! z2 W0 S- S) _4 E4 \+ W$ Y1 y
6 h; {5 `: ?$ L, U你用的哪一款matrigel，我买的corning matrigel hESC-qualified matrix（354277），没有标明蛋白浓度，说明书稀释倍数70左右，还有板子一定要用non-tissue culture treated的吗；另外E8和mTeSR1使用上有什么不同吗，说明书只是说E8简化的，用起来是一样的吗，还是考虑价格便宜了，我现在买了mTeSR1。没经验，还望指导，多谢

guojiawei

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! F4 f! w$ R2 s4 z- h6 O! f# O
如果是细胞老化的话，建议找下原因，一般不会这么快。

1435887852

忽然间发现英文不好，都没法了解战友们的聊天

吃呆猫

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; D; n# S! Z* t9 ~2 U% W7 Z1 o3 g8 S8 Z+ O5 Z, J' E# O2 U0 K2 X. L
你好，想问下，你们人的干细胞例如H9是怎么感染的，我现在养的free的H9，想用慢病毒感染，但一换上病毒细胞就死，是不是要浓缩病毒还是用E8培养基稀释？

lchanlon

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* g  ]2 R* D1 H3 n) _# a
. d$ ~0 Y9 A8 W# \) F& F最好能浓缩一下病毒。我是这样做的
" j, s6 U, I! o（1）在培养基中加入ROCK（浓度10 uM）处理H9 ESC至少三个小时。
& {' H5 y2 [. f8 o! N; o" q) [+ e（2）用TrypLE 消化成单个细胞。: ?8 j& h/ s7 x; O
（3）把消化好的单个细胞 ＋ 病毒 ＋ ROCK (10 uM) ＋ polybrene (6 ug/ml) 加入到Matrigel包好的板子。
7 O1 U( d" C; f: z（4）37C， 5% 培养6个小时，去掉病毒，换成新的培养基。

吃呆猫

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, ?& c+ ?5 E, t6 n9 y) ~! o4 Z
! Q5 m! C1 X" q& Z7 o6个小时细胞能贴壁吗？感觉干细胞应该有点难，我用的是LN521包板。能直接浓缩病毒然后处理贴壁的细胞么？后续的刷选，也是同样加pure之类的吗，浓度有什么要注意的么？

lchanlon

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" c& e8 G5 D* o/ y8 |3 n1 o0 n5 c1 f6 [
不用担心，很容易做的。人类的胚胎干细胞两个小时就能贴壁了。也可以用病毒处理已经贴壁的细胞。我用0.4 ug/ml puromycin to do selection.

吃呆猫

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8 l9 M8 f: P$ K0 P* ?$ f谢谢，谢谢