如何养好人的胚胎干细胞

吃呆猫

回复 lchanlon 的帖子# r; D3 k% |; b* X) `8 I7 E
9 a5 e( k8 X7 T9 }* m2 Y5 x
知道原因了，谢谢

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回复 lchanlon 的帖子4 ?: b9 b% O% c) [& M; N
$ h; f2 |& _" A
你用的哪一款matrigel，我买的corning matrigel hESC-qualified matrix（354277），没有标明蛋白浓度，说明书稀释倍数70左右，还有板子一定要用non-tissue culture treated的吗；另外E8和mTeSR1使用上有什么不同吗，说明书只是说E8简化的，用起来是一样的吗，还是考虑价格便宜了，我现在买了mTeSR1。没经验，还望指导，多谢

guojiawei

回复 吃呆猫 的帖子
# d3 F7 B# z7 h
) w4 }4 G# I: s' @如果是细胞老化的话，建议找下原因，一般不会这么快。

1435887852

忽然间发现英文不好，都没法了解战友们的聊天

吃呆猫

回复 lchanlon 的帖子- @  N6 C+ V, l! C" O, s
" d7 M, t# C4 \
你好，想问下，你们人的干细胞例如H9是怎么感染的，我现在养的free的H9，想用慢病毒感染，但一换上病毒细胞就死，是不是要浓缩病毒还是用E8培养基稀释？

lchanlon

回复 吃呆猫 的帖子8 N( _5 K, s( j9 m( F0 R2 \
1 {- ?6 b. @/ P
最好能浓缩一下病毒。我是这样做的9 b8 r9 O' L/ J8 v- E7 b; B# E, r
（1）在培养基中加入ROCK（浓度10 uM）处理H9 ESC至少三个小时。
# l4 U' L# Q. u( i" X（2）用TrypLE 消化成单个细胞。) B- ~* ?) n* ^3 G+ O
（3）把消化好的单个细胞 ＋ 病毒 ＋ ROCK (10 uM) ＋ polybrene (6 ug/ml) 加入到Matrigel包好的板子。
) d4 E/ G& V3 |2 M; e  V! ]（4）37C， 5% 培养6个小时，去掉病毒，换成新的培养基。

吃呆猫

回复 lchanlon 的帖子+ M+ j9 r- L- S! {$ @- I
1 |1 _% [0 }7 ?- M
6个小时细胞能贴壁吗？感觉干细胞应该有点难，我用的是LN521包板。能直接浓缩病毒然后处理贴壁的细胞么？后续的刷选，也是同样加pure之类的吗，浓度有什么要注意的么？

lchanlon

回复 吃呆猫 的帖子6 o4 [8 n$ h; `8 y$ A( P, I7 y1 X

4 o: c) e; Q; o6 H% d不用担心，很容易做的。人类的胚胎干细胞两个小时就能贴壁了。也可以用病毒处理已经贴壁的细胞。我用0.4 ug/ml puromycin to do selection.

吃呆猫

回复 lchanlon 的帖子- I( Y- \' Y; |  h" _$ d" p; n
) P; t, V' T0 I7 p; D9 S1 s
谢谢，谢谢