关于胚胎干细胞及其衍生细胞的混合淋巴细胞培养试验

Diane0321

最近一直在做胚胎干细胞及其衍生细胞的混合淋巴细胞培养试验，遇到了些问题，不知道是为什么，希望有做过这方面试验的站友们一起讨论下，看看问题出在哪。% I+ D. x) u1 u- T: |
具体的试验方案就是按常规的方法种植对应的刺激细胞（包括ES,HepG2等），贴壁过夜后，加入等数目的淋巴细胞（CFSE染色）进行共培养，7天后收集悬浮细胞通过流式检测荧光强度。
# K, K4 X5 b+ A4 O( J# x# X) k阳性对照是在含有PHA的培养基中培养的淋巴细胞，结果如下图：
% R9 V7 e- a! |4 T+ @0 n不知道为什么本该出现手指峰的阳性对照，细胞全扎堆了，没有出现增殖峰，这让我很是头疼，希望有经验的大神能够分享一下你们的经验，帮我看看我的问题出在哪？# }! v- d$ o1 E& ^: o1 E
最后还有个问题，不知道各位的刺激细胞和反应细胞的量是按照什么来定的？比例如何？