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吃呆猫

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楼主

发表于 2017-5-17 15:54 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

请教下，我做feeder用P3代mef，丝裂霉素（10ug/ml）处理2.5-3个小时，但是冻feeder的时候看着细胞状态还行，但是用0.05%胰酶消化特别快就掉下来了（感觉一加马上就掉下来了），一复苏死的特别多，状态还不好，是怎么回事

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jrfeng

新手上路

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沙发

发表于 2017-5-18 10:51 |只看该作者

捕获吃呆猫一只{:2_31:}

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时一清

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藤椅

发表于 2017-5-20 13:34 |只看该作者

你的P3处理前状态怎么样？

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innatestem

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板凳

发表于 2017-5-21 22:08 |只看该作者

1.使用丝裂霉素C处理MEF细胞制备feeder的时候，MEF的细胞状态很重要。
2.使用丝裂霉素C处理MEF细胞制备feeder的时候，MEF的细胞密度（汇合度为90%左右）很重要。. `7 s# s& U: P7 P
3.使用丝裂霉素C处理MEF细胞制备feeder的时候，丝裂霉素C处理的时间（一般2---2.5h即可，时间过长会影响细胞状态）很重要。6 b2 E Z; |7 e8 P2 y* p7 \# N& q
4.也有可能是你进行细胞冻存的相关操作不太规范，建议你规范细胞冻存的操作。
希望能帮助到你。祝好！