细胞复苏有哪些地方需要注意呢，为什么我复苏的细胞死了那么多

剡溪兰客

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那么麻烦干嘛，直接事先准备冰盐水到50ml的离心管中，复苏完毕直接把细胞加到前面的离心管。动作一定要快，帅不帅无所谓。

爱学习的青年

回复 剡溪兰客 的帖子2 r' e" |8 I/ ^* U0 b5 D
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冰盐水是冰到什么程度呢？还有盐水量是多少？细胞液加进去直接离心吗？

快乐男孩

遵循慢冻速溶的原理，还要注意你的冻存密度

sports123

你有没有考虑过，细胞冻存过程中存在的问题，以及在冻存后有没有被反复冻融过。如果上述步骤出现问题，也会导致细胞复苏后死亡较多

2357710447

细胞复苏的原则是“慢冻速溶” ，冻存的时候要缓慢降温，不至于形成冰晶损伤细胞，复苏的时候要快速融化，迅速放入37摄氏度的水浴锅中，当看到里面还有一点点的冰块的时候，马上停止，用酒精和无尘布擦拭干净管子，迅速将复苏的细胞转移到事先准备好的装有生理盐水的离心管中稀释冻存液，防止对细胞造成损伤，之歌过程操作的时间要短，时间太长的话细胞就会死亡或损坏细胞膜，以至于之后不会贴壁，及时你去细胞计数仪计数，细胞很多，它也是不会贴壁的，本来复苏的细胞就需要一段时间回复，很脆弱，及时勉强贴壁上去，也会像你说的那样形态差，或者直接不会扩增，细胞越长越少，知道最后死亡脱落。。。。。。希望对你有用

剡溪兰客

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& d+ _$ g( P  Q$ \; W3 [4度预冷的盐水即可

爱学习的青年

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) f# b! [; Z# o3 S. n6 [细胞液直接就加到装有预冷盐水的离心管里面吗？

剡溪兰客

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恩，是的

yangyaping

细胞复苏时，速度要快，从液氮拿出后迅速转入37-40度的水浴锅中；PBS事先也要37度预冷，这样可以提高复苏率，还有就是你的冻存液的组成，如果冻存液配比不行的话，冻存效果也会一般

innatestem

3 e( L$ m0 R9 }9 _8 N1 B5 U细胞复苏的注意事项：
8 H$ m: Y2 `( M+ _4 \1.做好准备工作，预热培养基，超净台的紫外照射等。
3 y. q1 U$ W3 A5 e2.细胞从液氮罐拿出来，防止被液氮冻伤。快速地用手揉搓10次左右，迅速进行37度------40度水浴锅解冻复苏，速度要快。并且在解冻过程中有规律地小心摇动冻存管以加速解冻过程。9 O  F, x# c" S
3.将冻存液转移至无菌的15ml离心管，用预热好的培养基中和，稀释DMSO，速度慢的话很容易造成细胞活率低。随后离心，弃掉上清。
  V0 X& Q/ i7 m9 A! D4.对于大多数类型细胞的复苏，待其大部分贴壁后即可更换新鲜的培养基。
- p. d% @5 I# Z+ o+ J' G* `5.对于特定类型的细胞，在复苏过程中还要添加有助于细胞存活以及成克隆的小分子试剂（比如Y-27632等）。
( ?" z/ x: l9 g: d6.另外在细胞复苏过程中，将细胞接种到提前（明胶等）包被好的培养皿上，也有助于提高细胞的存活率。0 @' o6 P1 p+ \: F- n5 h% d4 v6 N
7.还有一种情况是你在细胞冻存过程中，出现了问题。导致细胞在细胞冻存过程中的活力接降低了很多。
. P9 z( U, T# U' \% ?$ q7 x% f% ~希望以上的分析能帮助到你，祝好！