I型胶原酶消化脂肪，提取间充质干细胞过程中，这些间充质干细胞是不是处于饥饿状态呢

sports123

I型胶原酶消化脂肪，提取间充质干细胞过程中，用PBS配置的胶原酶消化30-60min过程中，这些脂肪中的间充质干细胞是不是处于饥饿状态呢，会不会对细胞以后的状态有一定的影响呢？求大神指点。

爱学习的青年

为什么会觉得细胞处于饥饿状态

sports123

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! U$ K6 e0 M% R在消化的过程中(30-60min),细胞没有接触到任何营养物质，细胞会不会处于饥饿状态呢？

rzghc

) k! r& K  {) X* ~! q
6 J" _' n+ v" w" J8 S本身新鲜的脂肪组织中就有各种结缔组织、血管、祖细胞提供营养的，消化过程中主要还是胶原酶对细胞的影响大一些，想要消化过程中活率高一些可以使用dmem配置胶原酶，或者可以低温过夜消化组织，不过pbs配置的胶原酶消化完后细胞活率稍低杂质稍多但并不影响后期培养。

sports123

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2 s& A. g3 F/ |% j8 K* I请问，用DMEM配置胶原酶还需要加血清吗？

rzghc

回复 sports123 的帖子. }/ `( E; t5 F* b9 _
4 F9 K1 g  J& Y' z) g
加血清就终止消化了，不要加

sports123

回复 rzghc 的帖子8 U* o6 K0 m3 c
! A$ o; J7 M2 X6 i
血清可以终止胰酶，但对I型胶原酶是没有终止作用的

rzghc

回复 sports123 的帖子5 L- ?+ E8 _% f; ?) c3 O3 E

2 |1 m9 M+ \' \. Z' m" `& ~0 R这个倒是没做过实验，以前看文献是有加血清终止，配置不用加的

Amy1114

我们用的胶原酶是用汉克斯液配制的（Gibco的说明书上就是这么写的）。因为汉克斯液里含有葡萄糖，对细胞有营养作用，所以还好。4 `2 m" z; y- m- _
另外脂肪组织取到过后应在4h内处理完毕，得率较高。4°C保存。: F; ?0 X# d% I, D' R0 j
再有就是，离心的时候建议用低温离心机，4°C离心。3 Z0 `7 a1 ]7 Y

/ s! w* Y4 g* t: n5 L但是胶原酶消化的时候温度一定是37°C哈

sports123

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( L8 C$ H5 R0 I  y8 D/ T6 @恩恩，谢谢，我们现在用DMEM配，用起来也不错