关于血液加入到淋巴细胞分离液中的问题

wzs1985

回复 阿秀哥 的帖子; \# ^3 R7 }7 |& C

5 b% A3 w/ }6 k' W对的，  抱歉弄错了。7 K1 p; k( w1 R- ~. `
或者1比1也行。

Mrhydra52613

回复 gsg040222 的帖子: ^; {( {" O$ Q# O: w' v
8 Z3 t4 K8 c2 n8 z
效果怎么样？话说你们实验室离心速度一般用多少的，我看论坛里这方面的差别还挺大的

long3390hai

回复 gsg040222 的帖子: V% s" @' ^- G8 Z
4 j2 l" b! R  q% e- f" T
1、离心血液，去血浆，加等体积盐水稀释。' S! p" O3 `4 |. K: E+ @
2、混匀血液样品，在加好淋巴分离液的离心管（淋巴分离液：血液=1:1.5）中，沿管壁加入血液样品，先在管壁涂好一条通路，然后缓慢加入，保证液面不被冲破。, h! p: s* x. Y3 ^
3、离心转速慢升慢降。
/ P6 j5 y0 I5 [2 `8 C* X4、离心之后，取其上清，在白膜层上方1cm，和下方1cm，全部取出。加盐水混匀，注意盐水和取出液体的比例大于2:1，这样有利于提取PBMC。

gsg040222

回复 long3390hai 的帖子: H8 W+ f% U6 T" R: |8 ?8 U
7 @( G; U* i+ L! R
谢谢

gsg040222

回复 Mrhydra52613 的帖子
4 q$ f: N; }2 r# k' U
  R  B$ b8 h+ @+ J( t( Z效果还是挺好的，我之前离心的话用的是3000r，效果还是挺好的，但是还是想更好点

gsg040222

回复 Mrhydra52613 的帖子0 f! j1 j# ~( W1 X, x' R4 K$ e

- p3 H: B3 T3 V! l3 }恩恩  ，就是要这个，非常感谢您

jxsese

加分离液时候要小心加入，一定要加到管底，不要沿着管壁加，另外每一种分离液用量都不一样，我们的一般都是稀释血液2：分离液1的量来加的，加的时候一定要调小移液枪的打出速度，第一个10ml越慢越好，后期可以适量加快。

wjh四月

全血离心后去掉血浆，加生理盐水补到原来位置，混匀，混匀后的血与淋巴液1：1加入。离心。15ml离心管效果更好

gubingxia

1盐水充分稀释（比例大于1:1）
# T' g! D  `9 F1 R2重悬混匀（不能有团块）
/ ]4 z/ d! Y% d1 \0 R3血液与分离液比例1:1) h; t; O; l% S, G
4离心管倾斜45度左右，刚开始必须缓慢加液，先用吸管勾勒出缓冲通道，向上提一下，不能让血液直直的冲下去，冲力过大会冲破分界层，分界层建立后加液速度可逐渐加快，随着液面升高离心管慢慢直立起来，因为分离液有毒，要尽量减少与血液的接触时间，还要防止时间过长红细胞沉降
; n# \) k, Q  c8 P. O5离心升10降19,600G
; a' \7 f# H) {: _& S6取送离心管的过程要小心翼翼，不能晃动，以免打乱分界层。. O  v' ~0 J; }2 N  T( h
7可以先把上层浅黄色的血清吸走，留约3mm左右，眼睛的视线要与分界层平行或者从下往上看，以便更好的观察分界层，用吸管紧挨液面缓慢转着圈吸白膜层，边吸边轻轻移动，直到肉眼看不到有白膜层，尽量少吸白膜层以下的液体1 M9 V- S1 r" B) v
8加盐水洗涤充分，离心洗涤3次，第一次1800r,5min,第二次1600r,5min，第三次1400r,5min
- `% u. w# t" n" {7 g! G9培养/ Y, G6 P8 g8 f. k/ f" K: a* Q
我们就是这么提取的效果不错，希望对你有所帮助。离心力可能会因为离心机的品牌不同，参数也会不一样，这个要根据实际情况来调整。我们用的是四川曙光 的离心机

曦馨橙子

感觉稀释液可以多加点，混匀，不要有血块~