关于血液加入到淋巴细胞分离液中的问题

wzs1985

回复 阿秀哥 的帖子
5 ^, M1 \; @. Q1 r* o3 t% `( }1 j6 e; s6 Y* d4 n
对的，  抱歉弄错了。
0 E) p" W5 F1 o$ `% a3 ~或者1比1也行。

Mrhydra52613

回复 gsg040222 的帖子
$ A! a# I. y/ x9 F9 O& K( o- r" d8 X' Q7 L! P3 R
效果怎么样？话说你们实验室离心速度一般用多少的，我看论坛里这方面的差别还挺大的

long3390hai

回复 gsg040222 的帖子
3 B( B1 E. }/ ~+ Z+ m, q4 F  I! x8 y- L* e  O$ ?
1、离心血液，去血浆，加等体积盐水稀释。  h! f9 J0 Z9 I; [4 w
2、混匀血液样品，在加好淋巴分离液的离心管（淋巴分离液：血液=1:1.5）中，沿管壁加入血液样品，先在管壁涂好一条通路，然后缓慢加入，保证液面不被冲破。2 ]/ Z- @# o+ h" w) R- C' R" `
3、离心转速慢升慢降。1 L" Y: l' F. c+ I2 ~
4、离心之后，取其上清，在白膜层上方1cm，和下方1cm，全部取出。加盐水混匀，注意盐水和取出液体的比例大于2:1，这样有利于提取PBMC。

gsg040222

回复 long3390hai 的帖子$ @+ ~6 C3 D; _" F

8 [& U1 C/ x9 g0 c6 M谢谢

gsg040222

回复 Mrhydra52613 的帖子0 x, c# T* Z  O, R4 ]0 Z. h

$ F2 Z$ D+ F2 {9 \9 T效果还是挺好的，我之前离心的话用的是3000r，效果还是挺好的，但是还是想更好点

gsg040222

回复 Mrhydra52613 的帖子
5 f1 Z7 e" K+ G0 ]+ p* X6 Z) N/ d7 l
恩恩  ，就是要这个，非常感谢您

jxsese

加分离液时候要小心加入，一定要加到管底，不要沿着管壁加，另外每一种分离液用量都不一样，我们的一般都是稀释血液2：分离液1的量来加的，加的时候一定要调小移液枪的打出速度，第一个10ml越慢越好，后期可以适量加快。

wjh四月

全血离心后去掉血浆，加生理盐水补到原来位置，混匀，混匀后的血与淋巴液1：1加入。离心。15ml离心管效果更好

gubingxia

1盐水充分稀释（比例大于1:1）# N. j& W$ j1 _
2重悬混匀（不能有团块）
, Q0 k- E# K) i3血液与分离液比例1:1
8 ^% P6 S; e. b. ~7 }4离心管倾斜45度左右，刚开始必须缓慢加液，先用吸管勾勒出缓冲通道，向上提一下，不能让血液直直的冲下去，冲力过大会冲破分界层，分界层建立后加液速度可逐渐加快，随着液面升高离心管慢慢直立起来，因为分离液有毒，要尽量减少与血液的接触时间，还要防止时间过长红细胞沉降. ?7 o2 ]2 \) H3 W! e, |. g% Y" C
5离心升10降19,600G7 [* X" n* w& ~% o
6取送离心管的过程要小心翼翼，不能晃动，以免打乱分界层。
( U. X4 m1 m, w8 i. ]6 d, P" W1 Q7可以先把上层浅黄色的血清吸走，留约3mm左右，眼睛的视线要与分界层平行或者从下往上看，以便更好的观察分界层，用吸管紧挨液面缓慢转着圈吸白膜层，边吸边轻轻移动，直到肉眼看不到有白膜层，尽量少吸白膜层以下的液体; x) K5 i7 E% N1 T
8加盐水洗涤充分，离心洗涤3次，第一次1800r,5min,第二次1600r,5min，第三次1400r,5min9 G/ x/ M; ]0 \6 n" K
9培养
  J5 U' o/ l" i' N+ j( f" h3 N7 C我们就是这么提取的效果不错，希望对你有所帮助。离心力可能会因为离心机的品牌不同，参数也会不一样，这个要根据实际情况来调整。我们用的是四川曙光 的离心机

曦馨橙子

感觉稀释液可以多加点，混匀，不要有血块~