机械法传代如何更好的将干细胞团块弄碎

随风的天使

我做的是牛的胚胎干细胞，我采用机械法传代，但总是团块很大，请问各位高手机械法传代如何更好的将干细胞团块弄碎？

zpzp0312

楼主是传代？+ }8 Q) T9 r0 E3 y" M
还是分离？
6 S; A/ R$ `! U7 ^! ^" s按说传代时没有必要用机械法了，酶消化完全可以啊！# C# N3 u; C$ ], }& F- l
即使是人的ES细胞

随风的天使

是的，在小鼠和人上干细胞传代都是用胰酶消化的，但是牛这种大的动物比较特殊，用胰酶消化容易分化，所以尽量采用机械法分离和传代。我曾经试着用胰酶消化传代过，效果不好，所以现在总是机械法传代，但是感觉块太大了。不知道有没有好的办法弄得块小点。

zpzp0312

是不是可以考虑将克隆挑出后，使用微针将集落撕碎。
) I0 g, S5 i3 f& a( ?' |或者直接用刀片将集落划成小块再接种到新的培养体系中。7 K. w% [5 Y2 c) K9 R/ R& @
类似方法在人的胚胎干细胞传代中也常用到。( Y: c. T! E% u- n% w
但现在看来人的胚胎干细胞完全可以使用酶来消化，并不会造成大范围的分化。
: c- w% U0 P: R因此，对于牛来说，或许培养体系还不完善，有待改进！; j+ [! E  p! c$ D: m  Q
我想可以从信号通路寻找解决的方法，使用有关的化学试剂去避免分化，优化培养体系！% R! x/ B' C: s7 K$ I9 A
呵呵，这只是一个想法，如果真的实施起来，还是有很大难度的

cortex

用巴斯德管拉的针，在干细胞集落上划井字形，然后轻轻挑起，集落大小均匀。刚开始有点困难，不过，熟能生巧！* |8 ^2 i- ]/ `8 ]$ o( Y* }, T
祝实验顺利！

have-a-rest

同意cortex的说法！+ ^: S: f6 p& P9 t; u* U
拉针很有技巧，拉熟了可以运用自如、出神入化，一般针越粗，挑的团块越大。1 \% |4 J& w2 E$ a, F2 v
酶消化可以考虑dispase或胶原酶，胰酶也许不太适合！. e& s0 K6 A6 `5 }
都样上牛的胚胎干细胞了，真牛！

jlhua

thanks

随风的天使

我每次传代时总是用口吸管的针将团块弄碎（团块大小不一），然后将团块传代，因为团块大小不一所以传代的克隆也是大大小小，总是出现不了在人和小鼠上那么漂亮的克隆。牛的培养液的确是没有很确定的体系，我现在也是在慢慢寻找合适的因子，保持它的未分化状态。如果用刀片切割是美容手术刀吗？非常感谢！

随风的天使

非常感谢，我每次使用口吸管拉成很细的针，也许是我的技术问题，撕成的团块很不均匀。我试试您的办法！

随风的天使

非常感谢！这几种酶文献中提到过，都有促分化的功能，我只做过用胰酶的，效果不好，还是只能是机械法传代。