hESC conculture with op9

大漠

hESC conculture with op9
5 j- u6 @! d. m7 ^( v, _) p我在做人的胚胎干与OP9细胞株共培养诱导造血分化，做了几次均失败，主要是培养到4-5天时OP9细胞状态就变得很差，直接导致分化克隆坏死脱落。原因不知道？细胞株均是从美国买回来的，方案也是按照文献上的报道做的。敬请各位有经验的师兄师姐给予指导。谢谢！

大漠

和大家分享一下成功的喜悦。主要是培养基的问题，必须使用不含核糖核酸和脱氧核糖核酸的a-mem培养基，血清也要使用HYCLONE的特级血清。否则养出的op9细胞肯定用不了。我已经做成功了。

xianchen

楼主，你在北京吗？我想求你给一支OP9的细胞，我们实验室刚从ATCC买了一支，结果养得状态很不好。想跟你联系交流交流。

wildspace

回复 2# 大漠
; r( e1 Y+ K* H2 C4 |' P9 {
' `  g* E# }3 Y3 G2 q) R. E# N9 O# N3 b& Z
    LZ你好，我们实验室近来在做这方面的实验，但是没有细胞株，能跟你们老板联系向他要一只细胞吗？你能跟我联系告诉我你是哪里的实验室吗？谢谢！

大漠

不好意思，最近忙，没有上网。我有ATCCop9，状态不错。但是还是出现以前的问题，希望有高手提供点经验。我怀疑可能是HES细胞株的问题，但是，我手头只有一株细胞。楼上两位的HES细胞是哪个细胞株？我们可否交换？谢谢！

痞子的烟头

我以前做过与OP9共培养诱导分化dendritic cell，前提是到CD34+，FACS检测效率很不错，时间太久，提几点意见。仅供参考& Z! S4 Y& c. F5 x" d9 e
1. a-MEM 培养FBS至少20%' O1 [5 o6 q/ @3 q1 I' L1 w9 s
2. HES 接种时克隆要尽量大点" D" P+ m$ n: c
3. 一般共培养五天，重新接种，期间3天时，半量换液& N6 U3 H* D  Z' e# _" P
4. 最要的是要保证OP9在做为FEEDER之前的状态；往HSC方向，最后肯定要漂的；

大漠

版主，您好！你讲的注意事项我基本都注意到了。我的op9是才从ATCC买回来的。状态很好。a-MEM是现配现用。FBS一直用的都是20%。可就是op9只能维持3-5天，从第2天就看到状态变差，最后，细胞就完全脱落了。根本没有办法做下去，按照WILcell protocol应该可以维持到14-21天。所以实在没招了，才想到是否由于HES细胞株有影响。敢问斑竹用的是哪个细胞株？能否向您请教请教，我的QQ393064897.谢谢！

大漠

这是我培养的op9细胞。状态很好。由于实验需要，恕不免费赠送，若愿意，可以用hES交换。

maz_2008

学习了！！

fengxuan

学习