细胞培养问答

细胞卡也

15 冷冻保存细胞之方法？: U: s2 b6 i3 D0 `" T
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4 °C 30~60 分钟→ (-20 °C30 分钟*) → -80 °C 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
# q' u7 l. C0 w' [" v( [! U冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 °C 至–80 °C 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 °C 不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C 冰箱中，惟存活率稍微 降低一些。5 e; M) t" U% A( h6 z" y% \- A
16 细胞欲冷冻保存时， 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？
1 d2 u* `) `- x冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial， 融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜。0 x- Y5 p0 I+ V6 Q" R6 |% H- T: y7 \
17 应如何避免细胞污染？ 细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。8 w) `: M+ r$ P/ h0 P
18 如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？. W6 f! ^: w- k) o
直接灭菌后丢弃之。
" ^; T5 J* l+ q" x; N& f19 支原体(mycoplasma) 污染的细胞， 是否能以肉眼观察出异状？- y* L2 G) {: a- z3 M+ {! U
不能。除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，
6 Z' L% o1 Q) O; O" O# T无法以其外观分辨之。
2 @( w& M3 v% }20 支原体污染会对细胞培养有何影响？0 d4 Q' p$ E6 p
支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数， 代谢及研究之任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。

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