关于间充质干细胞纯度的问题，主演是CD105+的问题

gsg040222

最近培养的间充质，细胞纯度一直上不去，细胞形态也正常，但是就是CD105+的表达极低，甚至有时候都到10％左右，在培养皿中，细胞贴壁也挺好的的，就是用胰酶消化（0.03％-0.24％）细胞成团较为严重，离心速率为1200r，求解答啊

随时准备下线

应该把对照和同型对照图也贴上来。我觉得问题有二，1、胰酶浓度是不是有的低导致消化时间过长？2、是不是细胞培养老了，养过了？

qq417606285

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9 k$ R- J* {4 F
% M9 r7 y0 j* ?7 y$ {4 n细胞成团脱落可能导致流式出问题，感觉你的胰酶浓度是不是过低导致消化时间太久了

baby00000003

从调机器换抗体做起吧～

gsg040222

回复 随时准备下线 的帖子' V( c2 Y- g2 Z6 f9 x

  m: L/ b. z: ^- L; g6 e关于胰酶，浓度我从0.03％到0.25％都试过，并且消化时间都在四十秒内。$ S; v; }) B  ~* Y
关于培养时间，上面这张图的细胞是48h，我觉得细胞应该没有养过。

gsg040222

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3 A) D0 I: H3 K
2 I" l/ H  l: }胰酶浓度我从0.03％到0.25％都试过，并且消化时间都在四十秒内，时间很短，应该不存在消化时间过长的问题。

gsg040222

回复 baby00000003 的帖子+ W; z" `9 f6 K& i5 v: F

; D: B. B6 t( d* Z% ^但是期间有的细胞的CD105+的表达在99左右。。

fenglinzhu

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4 S# V+ J1 |8 W: ?) t2 B6 `4 d$ a. _8 [. `6 j: M% Z: D0 K6 m. _
如果你是冻存后复苏的细胞，建议你先传一代以后再跑流式。对比过冻存细胞直接流式，冻存细胞复苏后流式，冻存细胞复苏后传一代流式，结果又比较明显的差异。

随时准备下线

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( K, {$ d5 E8 Q! u: M; q回复 gsg040222 的帖子
( D' `. y! ^' ?* K
" R4 p5 U' C" e& I  a我用0.1%的胰酶在1min内消化没问题，但是低于1%浓度的消化时间就会延长，而且细胞消化是成片掉下来，容易成絮状，再次传代的话，细胞长的不均匀，会长出来一些细胞堆积颗粒，颗粒附近的细胞形态容易改变，这个是我的经验

gsg040222

回复 fenglinzhu 的帖子, L) }' ~9 U9 @4 y, ?  v, [

! C( q+ A& C+ a" \; H8 w这个我是复苏完了做一次，传一代再做一次，传第二代再做一次，多个样本对比，都是105的问题。