iPS冻存问题

he_liang

请问各位大侠，iPS的冻存方法是什么啊？密度那些如何？谢谢啊！

he_liang

有文章说到冻存液的配方的，但是没有涉及其冻存的细胞密度，同时想问问，是不是Feeders一起冻存复苏效果比较好呢？请各位指教！谢谢啊！

qizhi502

一切都和正常es的方法一样回复 1# he_liang

gemstone

人 悬浮液：DMEM/F12 +20% FBS0 @; h" E. i4 H7 L3 I4 j  B
    中和液：DMEM/F12 + 20%FBS+ 20%DMSO) r& T% h, ^. \7 L2 m0 w
    方法：首先用胶原酶作用10min，PBS洗三次，加入悬浮液，用细胞刮刀或者枪头机械吹打成细胞团块，准备好冷冻管后，加入等量中和液混匀，-80C过夜，第二天转入液氮保存。
! o. c1 V9 M/ M4 L* b   解冻：准备iPS培养液5ml（不用加入bFGF），37C快速溶解，加入5ml培养液中，离心1000x 5min，弃去培养液，加入2ml培养液混匀，同样离心，弃去培养液，悬浮细胞后接种于饲养层上。

gemstone

关于密度，没有特别要求，但是原则上不能太稀。我一般6孔板一个孔如果冻存2管，每管冷冻液0.4ml，如果冻存一管0.6ml。和饲养层一起冷冻解冻。

he_liang

谢谢版主的解答！谢谢！

sarah19860420

回复 gemstone 的帖子
. K& n1 ^& c! ~& b
2 q1 z& [( |: Y这里面的加入等量中和液的时候，是逐滴加入还是怎么样呢？如果不是逐滴加入，会对细胞有什么影响吗，恳请回答，谢谢:P

sarah19860420

回复 gemstone 的帖子
: y+ t5 B2 I2 c5 n3 ?8 ?) o2 t8 n+ @0 b: h9 H
不需要离心吗，彻底去除胶原酶的作用吗？

gemstone

不需要离心，操作尽量要快，特别是加入含有DMSO的冷冻液以后。