ESC的筛选 - 胚胎干细胞专区干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

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楼主

发表于 2009-12-7 18:12 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

如用含动物筛选标记ampicillin的病毒液转染ESC后，如何筛选阳性克隆呢？是否可以直接在ESC培养液里加ampicillin?谢谢大家了，本人新手，谢谢！

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沙发

发表于 2009-12-7 20:10 |只看该作者

应该可以

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藤椅

发表于 2009-12-7 20:11 |只看该作者

如果你的病毒是插入基因组的应该可以

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cony

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板凳

发表于 2009-12-7 21:01 |只看该作者

回复 3# wyannb
* l" M. z4 ~& K+ P9 C
我想不明的是，ESC培养液里通常加了双抗，筛选时加氨苄青霉素，还有筛选作用吗？谢谢

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报纸

发表于 2009-12-8 11:43 |只看该作者

回复 4# cony
你说的双抗是指普通的青霉素和链霉素吗，如果是这两个的话当然有效果了，青链霉素只是用于广谱杀菌用的，而氨苄青霉素是专门针对你干细胞上是否有抗性基因表达而进行筛选的。

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cony

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地板

发表于 2009-12-8 22:02 |只看该作者

回复 5# wyannb

2 E5 o* j7 u' J4 T* q
非常感谢你的回复！那如要做筛选，是否还得做个浓度梯度？还有就是因为病毒本身有egfp基因在，你觉得我这个细胞应该做怎么一个筛选设计呢？谢谢。。。

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7楼

发表于 2009-12-9 08:44 |只看该作者

浓度你可以参考文章，看看一般人家用多大的浓度，你病毒上如果有gfp那就更好了，可以通过荧光来观察并检验，先选择一个合适的浓度，然后在看看通过荧光观察

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