乳腺癌干细胞微球培养问题，新手

caughf

       我在用MCF-7细胞系培养乳腺癌干细胞微球时，文献报道5000个每孔的密度接种到超低粘附六孔板中，所以了获得单细胞需要对癌细胞进行消化，然后再接种到超低粘附六孔板中无血清培养，但终止消化时需要加入含血清的培养基的，这样一来细胞中不就有了血清吗，这怎么处理呢？
* _. a9 x% f( a, |& p( F! @2 z( @' g      我的想法是
$ w: [. ~. {, S0 @  h; i- A; V  j! Y1、胰酶消化后，加入含血清培养基终止消化，然后离心，获得细胞沉淀。+ n9 c! M9 L/ U3 {3 Q
2、接着用PBS清洗、重悬细胞。. |. B7 v$ D" J7 u
3、再次离心，获得细胞沉淀，去除pbs上清液，
2 W: q/ c8 y1 @- V/ N. a6 a% V4、用无血清的干细胞培养基重悬细胞，计数，最后调整密度，接种。0 U6 ~0 M  S$ W5 Q' h3 L3 s
     哪位前辈指点一下，这样可行吗？主要是二次离心后，细胞会不会损伤？或者有没有更好的办法？

奇幻雪蓝

二次离心，肯定会损伤的。不过可以降低离心速度或时间来减小损伤程度。这个没有万全之策，只有利益的平衡！6 Y% S  e7 r4 I! B
希望可以帮上你！祝你试验成功！

caughf

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( k( q5 h$ r7 I8 ~' [3 ~+ W0 D0 q# [6 w9 M) |6 z8 P! W
奇幻雪蓝，也做癌干细胞吗？我用的离心速度是800r/min，离心3min。你们有么有更好的方法，避免因清洗血清而二次重悬离心呢

wxl87

gibco有一种胰酶替代物TrypLE，消化后不需要血清终止，只需要大体积的稀释就可以。这个 可以解决你的无血清问题。相关的知识可以去thermo官网查询。

caughf

回复 wxl87 的帖子5 X& m2 u! z" D
/ p2 N# A' H% [- \
谢谢了，

奇幻雪蓝

回复 caughf 的帖子) b! V2 k+ \3 R0 U) C

1 F7 |2 D. k$ M; M# q调整速度和时间，好不好，自己确定！