请教

轻扬婉夕

有没有人用过stemcell公司的EasySep （human whole blood/buffy coat cd 34 selection kit &mouse sca1 positive selection kit），想请教下使用过程中有没有要注意的地方？谢谢！

janeyu

没有用过，这个试剂盒应该是用于细胞分选的吧，按照说明书做应该就没有什么大问题，注意的地方应该是细胞处理的时间不应该太久，会影响细胞活性的，一般细胞分选都需要细胞呈单个悬浮的状态，这个对于某些细胞可能有点困难，如果细胞需要继续培养的话就严格按照细胞操作要求不要污染了。

轻扬婉夕

谢谢指教~~

shihuijunm

　1. 准备浓度为5×107细胞/ml的培养液培养的单核细胞悬液。置于一个12×75mm聚苯乙烯试管。每试管不要超过2ml（即1×108细胞）。 　　* 推荐使用FalconTM 5ml的圆底聚苯乙烯管（Becton Dickinson,货号＃352058） 　　2. 按50ul抗体/ml细胞悬液的比例，加入EasySep负选人造血祖细胞抗体混合物（例如：1ml细胞悬液加入50ul抗体混合物）。混匀，室温孵育15分钟。 　　3. 加入EasySep 磁微粒，用移液器上下吹打五次以上，使之充分混匀。避免使用涡旋震荡器。磁微粒加入量为50ul/ml（例如：1ml细胞悬液加入50ul磁微粒）。混匀，室温孵育15分钟。 　　注意：试剂盒提供过量的磁微粒，抗体混合液用完后可将其丢弃。 　　4. 把细胞培养液补充体积到2.5ml。用移液管在试管中轻轻上下吹打2～3次使细胞混匀。将试管（无盖）置于磁极中。静置10分钟。 　　5. 将磁极连试管一起拿起，连续缓慢倾倒磁极盒试管，将需要的未吸附细胞转移至另一个新的12×75mm的聚苯乙烯管中。标记了磁微粒的非目标细胞由于磁极的磁场的吸引，仍然留在原来的管子中。保持磁极与试管倒置状态2-3秒，然后使试管口恢复向上的位置。 　　* 不要摇晃或者擦拭粘在试管口的液滴。 　　6. 从EasySep磁极中取出装有非目的细胞的试管，并将含有目的细胞的新试管置于磁极中，准备下一轮的磁微粒分离。

shihuijunm

　1. 准备浓度为5×107细胞/ml的培养液培养的单核细胞悬液。置于一个12×75mm聚苯乙烯试管。每试管不要超过2ml（即1×108细胞）。 　　* 推荐使用FalconTM 5ml的圆底聚苯乙烯管（Becton Dickinson,货号＃352058） 　　2. 按50ul抗体/ml细胞悬液的比例，加入EasySep负选人造血祖细胞抗体混合物（例如：1ml细胞悬液加入50ul抗体混合物）。混匀，室温孵育15分钟。 　　3. 加入EasySep 磁微粒，用移液器上下吹打五次以上，使之充分混匀。避免使用涡旋震荡器。磁微粒加入量为50ul/ml（例如：1ml细胞悬液加入50ul磁微粒）。混匀，室温孵育15分钟。 　　注意：试剂盒提供过量的磁微粒，抗体混合液用完后可将其丢弃。 　　4. 把细胞培养液补充体积到2.5ml。用移液管在试管中轻轻上下吹打2～3次使细胞混匀。将试管（无盖）置于磁极中。静置10分钟。 　　5. 将磁极连试管一起拿起，连续缓慢倾倒磁极盒试管，将需要的未吸附细胞转移至另一个新的12×75mm的聚苯乙烯管中。标记了磁微粒的非目标细胞由于磁极的磁场的吸引，仍然留在原来的管子中。保持磁极与试管倒置状态2-3秒，然后使试管口恢复向上的位置。 　　* 不要摇晃或者擦拭粘在试管口的液滴。 　　6. 从EasySep磁极中取出装有非目的细胞的试管，并将含有目的细胞的新试管置于磁极中，准备下一轮的磁微粒分离。