怎么制作鼠胚成纤维细胞（MEFC）？

zhangdagou

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楼上的兄弟能够告诉我怎么制作么？一般用0.25的胰酶在37度消化多长时间？如何判断消化好了呢？我每次制作的时候 总是觉得细胞量少，还有就是把鼠胚消化成糊糊状了  在离心管中始终无法将细胞液和组织分开出来

wuxiao101325

加EDTA的胰酶一般消化5min即可，消化液用100微米或200微米筛网过滤即可分开细胞液和组织，建议参考http://www.stemcell8.cn/thread-16869-1-1.html

wuxiao101325

不好意思，应该是100目或200目筛网，孔径好像在70微米左右

zpzp0312

吹打！~~~

ouyi2738

回复 1# zhangdagou
+ ~! \1 {) l! z/ P  y" Z我说的絮状就是组织块不明显了。要细胞量多可以稍微消化时间长一点15分钟左右。另外你说的粘稠物应该是细胞破碎产生的DNA，可以在消化液中加点DNA酶，或者减少每管组织块的量增加胰酶量，组织块剪碎，消化时间短就不会有大量粘稠物产生。
9 F) H) \% _7 O( H2 n) k2 s如果在消化后，还是出现了粘稠物，无法将细胞离心下来，你可以试一下将离心后的上清尽量吸出，向剩下的胰酶残留中加入5倍以上体积的培养液（+10%FBS），然后全部倒到培养皿中培养（不过筛网），第2天或第3天时会有大量的细胞贴壁（尤其在组织块周围），换掉培养液，用PBS洗，大的组织块可以直接用枪吸掉，胰酶消化将细胞重悬后再加入培养液培养（不用分盘），半小时后换液换掉所有不贴壁组织和细胞，这样做要比组织块贴壁来得快，细胞量也比较大。

zhangdagou

首先谢谢楼上的朋友们，我后来做了一次，消化8分钟后中和，总共消化了三次，取得的细胞量很多，状态也很好

meiying3061

回复 zhangdagou 的帖子5 O! l2 K2 y5 U: Q

( R; s( L7 A* \* u2 J9 ]0 w  w你好，请问消化了3次是什么意思啊