neurosphere culture

iseeyou1210

不知道哪位能贡献一个比较好的protocol。
" J# n. P* J2 W% j* V' A( P我看到publication上面说能传到p20-25，. g0 P0 X6 y" e# m0 _0 ?0 J
我做的一般就是p3-p4就没有了。
2 {# X" p' D9 P7 |" [5 }% @谢谢了先！

guojingjing

我们一般是将原代细胞培养在6孔板中，3-5d后neurosphere形成，通过顺时针旋摇可以看到大多数neurosphere都集中在孔中央。然后吸取这部分培养基，自由沉降，弃去上清，留200微升左右的培养基，机械吹打分散。或者加入低浓度的胰酶消化1-2min也尝试过，好像还行。种入新的培养基中。neurosphere在传到5代后仍有，但是一般都不用5代以后的，因为在传代过程中细胞性质可能发生改变。

iseeyou1210

有些研究要看long term self-renewal，所以最好能做long term passaging.& G" D1 r& V& r, g: C( E
for example, ptem NSCs proliferate fast in early passages, but drop down after something p20-p25.

wzx6660

学习

smkx

跟取材的小鼠年龄有关吧

iseeyou1210

i am always using e14.5-e15.5 embryos.

lymphj198511

郭晶晶的方法好像可以试一下，能不能说的再具体点呢。比如说自由沉降多长时间？怎么能保证去上清时不把细胞一块给吸掉了呢？

ouyangjuan

回复 1# iseeyou1210 7 ^9 c: @; l( A9 f4 O
* W# d! b3 b. M3 v7 z0 ?7 X
; X  e9 v! J( N9 S% F2 }  @
    你可以看看这个文章！我但是就是看这个做的。还有JOVE上的《Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors》也有一定的指导意义。
; \5 S' S. f7 w' Q6 c链接地址：http://www.jove.com/index/details.stp?ID=152