干细胞成骨和成脂诱导最新方法

我是鱼

一、成骨诱导体系：
$ P/ H/ s5 o* {, H% \8 ^7 p7 J* h- r3 p) {' E
1. 试剂
4 V. M" j7 ?) G- P* K7 y, W
' V  S! E% f( M9 N  z' ~成骨诱导液：DMEM+10%FBS，双抗，谷氨酰胺，诱导因子：4 N$ l  U) ^& k7 t3 L

5 e9 ~# N5 }9 |9 u# q: q地塞米松：通过促进Cbfal mRNA和Osterix mRNA的表达而促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化。
/ d8 ^$ ~9 T9 r+ t
1 Q1 e3 e3 p1 u. `4 I4 g+ vβ-甘油磷酸钠：可促进地塞米松对MSC的的诱导分化。  d9 T* |8 t- E) t
2 P5 H! F* c+ y) j
Vc：一种重要的营养素和氧化还原剂，在骨盐代谢及骨形成中具有重要作用。在体外，它能增加钙盐的沉积，促进矿化结节的形成，并通过间充质细胞间接调节破骨细胞的分化。维生素C能直接抑制核因子κB受体活化子配体（RANKL）诱导的破骨细胞形成 。6 W3 y' `; H+ F, A

5 R. z, G  ?2 A2. 诱导步骤
1 f8 Z* b- q7 D) q, s3 l& V' C/ d9 T& v* W  N" V  C- a% }* B5 y
（1）待干细胞达到80~90%融合时，消化。) t$ J5 u2 |% l7 I5 x) w- W

! R, Q4 R' v/ i( m& Z9 \0 I（2）将干细胞接种于六孔板中，每孔约3x103个细胞，加入2ml / 孔干细胞完全培养液。放入37°C，5% CO2孵箱中培养。. v" I, Q6 R  G

7 @; S/ o( _5 x（3）24h后，移去旧的培养液，加入2ml孔成骨诱导液。1 X/ J% h1 g9 V9 A
" ~3 Y" H8 _3 s6 ^
（4）每三天换液，诱导2-3周。' K$ K+ ^( }, D$ H* z

$ A% O6 U* J8 F, V8 {, [/ N（5）2-3周后，钙结节形成，进行茜素红染色。
! a3 H; F& y4 \/ O7 A/ p
! C# q5 S! y( p二、成脂诱导体系：/ y: _5 t& y7 v; k9 x* a

3 P2 G% e, J% U8 l4 j7 \6 Q1. 试剂
+ W2 y* i3 f0 T/ D5 x( `6 q' |6 a/ X5 F
成脂诱导液A：DMEM+10%FBS，双抗，谷氨酰胺，诱导因子：胰岛素，IBMX，地塞米松，吲哚美锌。; j+ E. M) n1 `3 f! Q0 F. `# d& N

, f' C. v7 j/ x7 J' ~成脂诱导液B：DMEM+10%FBS，双抗，谷氨酰胺，诱导因子：胰岛素。
* N9 t1 B$ j3 e& |0 ~5 m: X5 o8 n) N
4 Y* C$ u9 F5 l" U; b2. 诱导步骤：
# d( ]' Y! w% j
. I1 j0 ]& ~0 `* l( i) D) r  X, n（1）待干细胞达到80~90%融合时，消化。5 a# a# D9 A* ~4 x  d' U
2 ]  N5 d' f, R" Z+ L$ f
（2）将干细胞接种于六孔板中，每孔约2x104个细胞，加入2ml / 孔干细胞完全培养液。放入37°C，5% CO2孵箱中培养。, s# N- d6 h; t+ g) c- d
( o1 o" H4 q( f, p+ O
（3）每三天进行换液（干细胞完全培养液），直至细胞达到100%融合。0 B/ m) \, t7 }* H% @

) S" O+ {. z9 _1 \9 q& g（4）待细胞达到100%融合时，移去旧的培养液，加入2ml / 孔成脂诱导液A开始诱导。
9 e8 b& a) i1 j- p" P
3 }- B9 J, H, s9 D2 ~. l" r（5）三天后更换成成脂诱导液B进行维持，24h后再更换成成脂诱导液A诱导，如此进行3个循环。
8 Y; R: x& L0 j" U9 t6 p
/ q. }9 U, X/ ~5 t8 L4 T（6）当脂滴出现较多，但比较小时，可以用成脂诱导液B进行维持3-5天，脂滴增大。
& ~/ U) g4 i$ E- q
& S; `- M2 P9 ^2 [! Q. }（7）油红O染色。

新月

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