干细胞培养（新手上路，独自开荒）

鲨鱼也蛀牙

新实验室，建干细胞平台，自己以前养细菌的，老师让养小鼠胚胎干细胞。& i( s. k# a' f2 ?5 v; V# s
我现在用的是：
! J0 K1 n9 ~  WN2B27+LIF 的 Feeder-free 培养基
) l2 S6 j, _  P) fE14 细胞系
8 E, P- V" ^: D遇到的问题就是& }, a" M+ L+ s  k8 T* ~. H. O
1.  90% FBS + 10% DMSO 的冻存配方复苏的细胞死的很多，活下来的细胞似乎很容易分化。# F3 a. x# u$ |4 V
2. 将在MEF上培养的干细胞adapt到Feeder-free上之后，传代还好，只要进行病毒转染或者药筛，瞬转等操作细胞就会死。
! C* D( n' y" |

鲨鱼也蛀牙

没有哪位前辈拉一把吗？求教啊

一颗酸柠檬

我养的是小鼠胚胎干细胞M1的，之前用的冻存方案是 完全培养基：血清：DMSO=5:4.5:0.5   复苏在MEF后，虽然死细胞多，但是传2代之后就长得非常好了，现在传了近10代了
' F+ a: f0 A8 Y0 D9 U不过后来公司给我冻存方案是 完全培养基：血清：DMSO=7:2:1   这个我只冻了，还没有复苏过，所以不知道效果  B5 ^2 [0 `& M  z
不知道能不能帮到你

huan5050

不知道为什么你要加N2B27,这好像是诱导分化神经细胞的。复苏分化很正常。干细胞不能铺太多，传代要保证吹打成单细胞，细胞之间接触就容易导致分化。