MC3T3-E1成骨细胞分化，茜红素染色分析求助！！！

陈小新

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3 m- |$ G9 D6 f7 Y& B2 B    各位前辈好，八月份在中科院上海细胞库购买了MC3T3-E1 sublone 14 细胞系，使用的培养基是推荐的 MEMα培养基（含50 μg/ml的ascorbic acid），诱导分化时添加了10 mM β-glycerophosphate，50 μg/ml的ascorbic acid 和30 nM dexamethasome，诱导分化14天，茜素红染色后PBS洗涤三次染色肉眼可见，如图，多次洗涤后肉眼看不到染色，如图，但是20倍镜下能够看到矿化结节，查阅文献分化结果染色如图肉眼可见且非常明显，想请教前辈们两个问题：1. 茜红素对矿化结节的染色的稳定性怎样，多次洗涤能否被洗掉？（因为PBS洗三次后有肉眼可见的染色，但多次洗涤之后则看不到了，我想知道这部分染色是否是真正意义的染色，还是仅仅是浮色或非特异的结合）2.怎样能够分化除如文献所示的结果，延长时间就可以吗？本人刚刚上手成骨细胞分化实验，请大家多多指教，谢谢！