小鼠BMSC原代细胞贴壁太紧！！求助~~

aristolal23

同问了，之前我养大鼠的BMSC原代很容易消化，但现在也不好消化了，我问了一个朋友说我养的时间有点长了，一般取完以后3-4天，而我6天后才传代，和这个有关吗？

why121

继续关注小鼠的消化问题 太让人郁闷了~到底是先消化下来的 还是消化不下来的是啊~~~~

胡问成

回复 1# angel-sakura
) `4 z8 w! u: \- X4 y
$ i# E3 U4 x9 B. ~0 |: H
( Y0 a( K! j. e* d. ^    粘附贴壁是MSC的一个基本特性，所以养它是最后不要让它长的太满，太满消化起来不但很慢，而且容易成团。如果不好消化可以用胰酶在正式消化前多洗几遍，洗的时候多用些胰酶，胰酶用前一定要温，或将吸管在酒精上烧一下，在吸胰酶。消化是放在37度。 收MSC最好不要用刮，这样细胞根本就是一团，还有胰酶反复开用长了影响它的PH值，也不还用，建议用小体积分装，密封好

angel-sakura

回复 10# why121 9 \( w- _' l" N4 |

0 z% G" @% M/ h: r谢谢你的答复，已经解决了，是BMSC老化现象导致的，后来分离了一批新生的·~长得还不错~

why121

回复 14# angel-sakura [/b 您好 我最近也在做小鼠 但感觉老不像间充质干的样子 能分享下您的经验吗？实在是很郁闷啊

angel-sakura

回复 15# why121
/ s: n9 G  r6 t% w3 U8 a4 ^) f, z& }3 K# ^; W2 w- q) u
能说具体一点吗?最好上传下细胞的图片~

why121

图片和楼主上传的差不多 想了解下楼主的消化时间和纯化的具体步骤

小熊不杀生

回复  why121
/ k/ Y# ~- F8 Y8 y4 {
7 c! S/ b1 S/ S! U+ Z9 X, I8 E谢谢你的答复，已经解决了，是BMSC老化现象导致的，后来分离了一批新生的·~长得还不错~
( m$ D' ~9 G- h' L: i5 ]9 Bangel-sakura 发表于 2010-8-11 12:59

& B( O- K; O  B( E$ N0 a. J/ G1 s0 _+ F5 L: ]1 k0 M: h/ e0 X
请问楼主，你怎么得知你的细胞是老化导致的难消化呢？除了形态学，有什么依据么？原代培养没消化之前就老化了么？其实关于细胞的代次问题，也是个疑问，大家是经过一次“胰酶洗礼”算传一代么？

angel-sakura

回复 17# why121
6 W6 r* N" k0 e! d1 N纯化的步骤就是不断的传代，大约3代左右就差不多了，然后再去测流失之类的。
  v+ u  Y% K7 k2 U3 O& h老化的这批细胞基本很难消化下来，之后分离成功的那批细胞消化2min左右就OK了，而且不加EDTA，个人觉得BMSC这种细胞很容易消化。

angel-sakura

回复 18# 小熊不杀生
) I7 ^+ J: |# c8 |! x9 t我经过多次消化后发现有许多细胞仍贴壁，并且多次消化后细胞的增长速度越来越慢，细胞形态变得越来越细长，细胞内部结构也变得看不清，所以我推测可能是老化所致，此外，还可以测量细胞内或膜表面的蛋白含量或分布为指标确定细胞是否衰老。至于细胞衰老的原因，和导师讨论后觉得是取材的小鼠年龄过大的原因，因为之后分离成功的那批操作也是相同的。此外关于代数问题，我导师说传到另一个皿中的时候就算一代，而不是胰酶消化后算一代。