小鼠BMSC原代细胞贴壁太紧！！求助~~

why121

楼主原来做的是大鼠的BMSC啊 但标题却是小鼠的BMSC 晕了！

zhaokun826

楼主看看胰酶是什么时间配的？
# U. J3 B/ W* P* p如果时间长了建议楼主重配

stefan

哎，我也遇到类似的问题，刚配好的胰酶还加了EDTA 就是消化不下来啊，真是郁闷死了，看楼主这么说。我感觉可能我的细胞也有可能老化了吧！真不知道这个到底怎么判断啊！

zkzhao_cpu

回复 lchanlon 的帖子2 J+ E2 i3 |7 n6 y$ _5 {* F4 h0 L
; t) T7 v& ~: A1 a
你好  我想请问一下你的间充质干细胞是从哪里买的？是小鼠的吗？谢谢

wf78365421

杂细胞太多。

漫步云端0511

回复 why121 的帖子
$ Y. B% v$ R" I
9 I- m% h! q, k6 d新手向高手请教，我是刚开始做小鼠BMSC，一直养不起来，请问用哪个牌子的培养基好，需要添加生长因子吗？

绝对忠橙

我觉得有几个方面：5 ^1 {# `' k& T2 P: o
1.准备消化前，把胰酶放入水浴锅，温度正常后放入超净台。
/ Z4 x* _0 J+ l9 B" e% F7 H5 ~6 p% s0 d2.倒掉废液，PBS冲洗两三次，其实吹打不会将杂细胞吹打下来，即使是造血干细胞这种悬浮细胞。5 S0 N* l  v; r2 R' j
3.加入1mL0.125%胰酶+EDTA后轻轻摇晃，要保证所有细胞都被消化，至半数细胞漂浮，半数边圆时加入完全培养基终止消化。
+ J& c* V5 c7 |说句实在话，真正的bmsc应该集落很明显，而且消化很容易，根本不用胰酶加温，冰箱拿出加到培养皿里边摇晃几下细胞两分钟就消化到位了，我可是用的0.125%的胰酶哦，楼主细胞这么长，像10代之后的细胞了。

绝对忠橙

回复 漫步云端0511 的帖子" u1 @% c# X! w& L! [: ^3 j

& ~% r  U( Q$ [: O生长因子肯定要有的，bfgf，谷氨酰胺类似物都要加

绝对忠橙

回复 aristolal23 的帖子
" c- B! L7 S( Q: r& F/ s+ T4 z% N* B+ y$ `" C: Y/ J5 h: j. P
这个和细胞接种密度有关系，我的经验是一只大鼠的细胞放两个T25里边，一般情况下5天或者6天就可以传代了

倒腾细胞

回复 angel-sakura 的帖子9 g5 P9 p' o$ P

' G& w* P1 S; v$ V- H  l/ L: E一 个 星 期 不 去 动 它？