小鼠BMSC原代细胞贴壁太紧！！求助~~

why121

楼主原来做的是大鼠的BMSC啊 但标题却是小鼠的BMSC 晕了！

zhaokun826

楼主看看胰酶是什么时间配的？
& a/ b, N2 {9 `8 s如果时间长了建议楼主重配

stefan

哎，我也遇到类似的问题，刚配好的胰酶还加了EDTA 就是消化不下来啊，真是郁闷死了，看楼主这么说。我感觉可能我的细胞也有可能老化了吧！真不知道这个到底怎么判断啊！

zkzhao_cpu

回复 lchanlon 的帖子5 ]# ^+ A, F/ P5 @$ r

" X9 e8 N: T  v- K8 }你好  我想请问一下你的间充质干细胞是从哪里买的？是小鼠的吗？谢谢

wf78365421

杂细胞太多。

漫步云端0511

回复 why121 的帖子" f& ^) {0 H5 M% @- N

5 o6 b2 B5 `- O: N/ ], C新手向高手请教，我是刚开始做小鼠BMSC，一直养不起来，请问用哪个牌子的培养基好，需要添加生长因子吗？

绝对忠橙

我觉得有几个方面：/ |9 g! ~- j" n. g2 K2 S4 H% K
1.准备消化前，把胰酶放入水浴锅，温度正常后放入超净台。) A2 ?; u1 y7 m, @+ q0 }  I
2.倒掉废液，PBS冲洗两三次，其实吹打不会将杂细胞吹打下来，即使是造血干细胞这种悬浮细胞。. J  D& z5 b  p, i1 m1 E
3.加入1mL0.125%胰酶+EDTA后轻轻摇晃，要保证所有细胞都被消化，至半数细胞漂浮，半数边圆时加入完全培养基终止消化。
6 j0 S7 L: Y" O$ M" b( c说句实在话，真正的bmsc应该集落很明显，而且消化很容易，根本不用胰酶加温，冰箱拿出加到培养皿里边摇晃几下细胞两分钟就消化到位了，我可是用的0.125%的胰酶哦，楼主细胞这么长，像10代之后的细胞了。

绝对忠橙

回复 漫步云端0511 的帖子
$ P$ s! \* h- Y- [8 d
8 [9 n: b/ A9 V3 X生长因子肯定要有的，bfgf，谷氨酰胺类似物都要加

绝对忠橙

回复 aristolal23 的帖子
( u7 j) a+ p8 j9 o! u( l  k; l" g
这个和细胞接种密度有关系，我的经验是一只大鼠的细胞放两个T25里边，一般情况下5天或者6天就可以传代了

倒腾细胞

回复 angel-sakura 的帖子! U) }. v: G0 [4 r7 p5 ~' a

1 w) m! B0 L' }+ x5 b一 个 星 期 不 去 动 它？