小鼠BMSC原代细胞贴壁太紧！！求助~~

倒腾细胞

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7 `2 [8 T2 |! g" T2 O4 s( I- u; l/ h# ~, @# u" ~
前辈 EDTA伤细胞 但消化完后我们加入培养基终止消化就直接离心去了 要怎么清除掉EDTA呢？

听不到

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4 m) p3 l5 @  |  t
2 t# ^, t8 R+ \1 b一定要加生长因子类似bFGF吗？

绝对忠橙

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0 [" `$ C. Y$ T6 ^+ L) V/ k7 M, n0 V" D6 }& U
不加形态会很难看

wuhuaguo88l

胰酶在37度时，活性最大，还是孵育一下，要么提高胰酶浓度% Q. E% T1 o2 c$ k9 G' N  L) X

ruxue8998

angel-sakura 发表于 2010-4-27 22:05 & U8 Y0 |/ C$ v% l) P( z9 n7 ]
回复 2# get0715
  ~7 K, [( I& u" G9 I我消化的时候是放到培养箱中孵育的，我是第一次做BMSC的原代，操作上确实可能有问题，而 ...

% j/ X* Y' F8 y3 X+ A7 A' n+ l
您好，请问培养的是小鼠bmsc吗？原代是怎么养的呢？有什么经验给我们晚辈传授一下吧！比如接种密度，换液时间，全换还是半换，还需注意什么问题？

baby00000003

这只是凭空想象的方法哈，$ a% P( O4 k/ T' n! k+ B# N
如果酶和细胞状态确实没什么问题的话，试试看low attach的瓶子或者平皿（可能corning和nunc都有），也许就好消化了

一僧化画

我更感觉消化下来的应该是MSC而未消化下来的可能是成纤维细胞，不知道我认为的对不对，最近也在提小鼠间充质干细胞，摸索中

一僧化画

消化前细胞要用PBS最少洗两遍，保证没有血清残留，要不然会影响胰酶活性

Leo_yihan

我也遇到过这个问题，之前加了胰酶需要10分钟左右才能消化下来，而且还需要大力的吹打才能下来，后来我加过胰酶把细胞放温箱3min就全消化下来了

yangyaping

胰酶是需要37度预热的，这样效果最佳，还有就是在消化前需把瓶内用生理盐水冲洗一遍，不然消化效果不好