小鼠BMSC原代细胞贴壁太紧！！求助~~

绝对忠橙

我觉得有几个方面：
/ t, j6 k* Z/ Z- N1.准备消化前，把胰酶放入水浴锅，温度正常后放入超净台。
6 Y; R# _" y" G  m. O7 L& Y* e2.倒掉废液，PBS冲洗两三次，其实吹打不会将杂细胞吹打下来，即使是造血干细胞这种悬浮细胞。
8 Q* [, A3 r$ Q3.加入1mL0.125%胰酶+EDTA后轻轻摇晃，要保证所有细胞都被消化，至半数细胞漂浮，半数边圆时加入完全培养基终止消化。
1 {% s8 K3 m. L: y! Z说句实在话，真正的bmsc应该集落很明显，而且消化很容易，根本不用胰酶加温，冰箱拿出加到培养皿里边摇晃几下细胞两分钟就消化到位了，我可是用的0.125%的胰酶哦，楼主细胞这么长，像10代之后的细胞了。

绝对忠橙

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. }0 z/ i' ?4 G$ J0 y  u7 L8 E" E! |. ^- U1 J% v* J. E
生长因子肯定要有的，bfgf，谷氨酰胺类似物都要加

绝对忠橙

回复 aristolal23 的帖子8 T3 H. s& e& O& B" k" p
: y8 M& x! a! I0 {. s1 n- ]( m
这个和细胞接种密度有关系，我的经验是一只大鼠的细胞放两个T25里边，一般情况下5天或者6天就可以传代了

绝对忠橙

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# X( F# _) E, L( y2 U: G
不加形态会很难看