小鼠BMSC原代细胞贴壁太紧！！求助~~

绝对忠橙

我觉得有几个方面：) v3 I  L) q9 Z7 b( z% B" n
1.准备消化前，把胰酶放入水浴锅，温度正常后放入超净台。' m5 O8 S" d: ~! m: p+ N
2.倒掉废液，PBS冲洗两三次，其实吹打不会将杂细胞吹打下来，即使是造血干细胞这种悬浮细胞。3 Y- [. B1 h1 w4 J, a# H0 f
3.加入1mL0.125%胰酶+EDTA后轻轻摇晃，要保证所有细胞都被消化，至半数细胞漂浮，半数边圆时加入完全培养基终止消化。, P2 h6 o+ J' Y* V9 Y2 A
说句实在话，真正的bmsc应该集落很明显，而且消化很容易，根本不用胰酶加温，冰箱拿出加到培养皿里边摇晃几下细胞两分钟就消化到位了，我可是用的0.125%的胰酶哦，楼主细胞这么长，像10代之后的细胞了。

绝对忠橙

回复 漫步云端0511 的帖子0 w. s( w) @9 B: A2 f
  x7 F5 N0 P3 @
生长因子肯定要有的，bfgf，谷氨酰胺类似物都要加

绝对忠橙

回复 aristolal23 的帖子
3 k: t+ \) u) n
5 t3 e2 W' A) C这个和细胞接种密度有关系，我的经验是一只大鼠的细胞放两个T25里边，一般情况下5天或者6天就可以传代了

绝对忠橙

回复 听不到 的帖子* e. T  b2 M' }! {# H) F
9 C/ {( B$ `# B) |1 C
不加形态会很难看