小鼠BMSC原代细胞贴壁太紧！！求助~~

绝对忠橙

我觉得有几个方面：5 ]1 h/ D# ~  K5 E. j
1.准备消化前，把胰酶放入水浴锅，温度正常后放入超净台。
4 ?. J2 C2 u5 ^) \4 K2.倒掉废液，PBS冲洗两三次，其实吹打不会将杂细胞吹打下来，即使是造血干细胞这种悬浮细胞。4 R# u, }+ j% J: J
3.加入1mL0.125%胰酶+EDTA后轻轻摇晃，要保证所有细胞都被消化，至半数细胞漂浮，半数边圆时加入完全培养基终止消化。
- n! n9 h9 L: y) V5 K! i说句实在话，真正的bmsc应该集落很明显，而且消化很容易，根本不用胰酶加温，冰箱拿出加到培养皿里边摇晃几下细胞两分钟就消化到位了，我可是用的0.125%的胰酶哦，楼主细胞这么长，像10代之后的细胞了。

绝对忠橙

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6 H  @1 v# K/ a
生长因子肯定要有的，bfgf，谷氨酰胺类似物都要加

绝对忠橙

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: e+ W( |- I1 J+ h8 z" A$ j6 g( m. W) b
这个和细胞接种密度有关系，我的经验是一只大鼠的细胞放两个T25里边，一般情况下5天或者6天就可以传代了

绝对忠橙

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: s! @4 H) W" r( f不加形态会很难看