关于MSC培养的心得经验

大胖子阿哥

1、 酶消化法和组织贴块法是分离培养UCMSC两种基本方法，但酶消化法存在酶的浓度和消化时间控制不好就可能会损伤细胞膜、降低细胞活性甚至改变细胞功能，而且操作繁琐，这不符合组织培养的基本原则，因为操作越繁琐，污染的机会就越多，细胞突变的概率也越大。从简单、方便的组织培养原则出发，组织贴块法优点更多：①方法简单：直接剪碎脐带为糊状直接培养，操作步骤少，大大缩短了实验室处理的时间，而且分离方法容易标准化；②经济适用：分离培养UCMSC的过程中不适用胶原酶，分离成本低；③安全性好：与所有干细胞一样，如何防范UCMSC在分离培养过程中的污染和变异一直是人们关注的一个重点。怎么才能最大限度地降低干细胞污染和变异的根本方法，比如简化体外分离操作环节，就可大大降低污染的概率，比如减少各种“外来物质”的接触，这也是<<人的体细胞治疗申报临床试验指导原则>>的基本要求：尽量避免异体血清、细胞因子、抗生素等“外来物质”的使用，当然酶消化法中常见的各种没也属于“外来物质”的范畴，减少这些“外来物质”的使用和接触，既可降低细胞变异的概率，又可有效防止各种病原微生物的传播。4 Y3 v+ a( r( g7 H7 X
: W0 w8 ]% `6 c% n& O
2、4℃冷藏室中静置30分钟，然后转移到冷冻室（-10℃—-20℃）中放置1—2小时，再转移到超低温冰箱（-70℃—-80℃）中放置过夜，最后将冻存管放入液氮中保存。如果没有超低温冰箱的话，可将冷冻室（-10℃—-20℃）中放置后的冻存管置于液氮罐的液氮上方的入口附近过夜再置于液氮中。
: d. q0 Z1 V$ ~2 j
  V( K; Q) d2 Z! e. U3、复苏细胞准备40℃温水，为了保证细胞活性，可将冻存管置于-80℃冰箱中放置30分钟，使液氨蒸发后再转入温水中，同时避免冻存管爆裂危险。
8 v9 y. F* R9 i. ~4 c( d9 G" I' t7 p3 ], Z
4、传代培养后的UCMSC生长速度远快于原代UCMSC，一般4-5天即可以达到80%-90%的融合度，此时可继续收集、继续传代培养或冻存。
: e5 e$ _) D* X: d; D9 p# S  c6 G5 O3 u
5、本实验室的脐带间充质干细胞扩增体系中，一条50cm的脐带，体外扩增至第八代即可满足上万人治疗用。) p, {. X" V8 w5 D0 w
" [; p+ j% y7 d, W. T' P7 W9 b9 U) N

summerpie

有用，谢谢