我做的“ips”，请战友们指点（附图）

hansey

感觉不是很像iPS克隆

liulilin

感觉不是很像iPS.  丝裂霉素百分之一处理3个小时。

liulilin

一般克隆在感染后15、6天出现 然后越长越大。还有就是iPS的细胞是圆圆的  核大大的。

msliyv

你那些貌似的小克隆像是凋亡的细胞。是不是这些小克隆都表达有导入的基因？另外我猜想你用的不是virus transfection导入方法吧？8 B0 G% M5 N4 [7 j8 |# K7 h

& k3 p" l" w% X& a# R- i8 w& {回复 1# 小刀

ambassador

另外，ips是不是如昙花一现般的即将谢掉了啊？1 x% P; W# p! B: a; _% F2 j
前辈们请高见！  B- V- [6 d; U) j! I
小刀 发表于 2010-4-28 22:50

8 h+ f% e7 R: _& s3 p- F+ A
9 U; C- {8 u# i1 z
* i! f, I' n( U0 I0 w' g    有这方面的担心！我给你看看2010.1.27由斯坦福大学Marius wernig 开发的一种新的细胞编程技术——成体细胞到定向功能细胞的直接转化！这不是跳过了iPS这一步么！！！

raymandd

朋友，7 Q' W0 c, _$ N) B7 K

, Y4 x2 E4 b% K! D我只做过病毒转染的yamanaka， 所以只能给你一些有关这个方面的建议。
6 I! B) H: K# T; g% ~病毒制备是最关键的， 你可以浓缩一下病毒，每种病毒病毒原液从30ml浓缩至900ul，每次用100ul/孔(6孔板)，（4种病毒共400ul）， 每孔转染3次。& l% q8 {+ r' q/ d2 X5 t1 e' n" c, y

7 _- A# X2 P& x! X% z/ x' ]) P你应该可以拿到20个克隆。  w( {; W) t% R, B+ \* r

# L) v/ ^  p2 ?6 s6 J* y. L& @" k$ K祝好运

Jonathan

回复 1# 小刀
; A- ?6 V9 @& z- B- v- X6 b% D6 B" c; `; a5 _& c0 Y
想问一下LZ，你发的几个图片，一个ips克隆我都没看见。请问你说的“ips”是哪个？3 K6 b8 V1 F% P1 g
6 T) T1 A& W5 t3 g+ ^
建议一下：加Vc吧。还有VPA，那样你会很快得到ips克隆。
) X: F) W8 P- W) z/ p# l& i: W* L: Z( j& x( ^9 H
还有，想说明一下，LZ发帖时，最好说明是人的或是鼠的ips，不然别人难以判断

ambassador

0 ~4 C+ z3 ^5 j4 z" i

有这方面的担心！我给你看看2010.1.27由斯坦福大学Marius wernig 开发的一种新的细胞编程技术—— ...: M0 Z; x" m6 }% }5 @' p* z
ambassador 发表于 2010-5-1 17:39

) U  A) y$ E/ `* n5 z
1 @- D! s( M$ X& b$ f
8 t1 F6 N% x2 B' X1 n! k# i
" A5 l6 @) s+ y& z+ K" ?
文献已经找到一并分享给大家！4 [2 R6 `" I8 @, Y
Direct conversion of fibroblasts to functional neurons by defined factors
* ?$ f' G4 _- V9 m9 d4 ^# s

上官鑫

请问VC或是VPA的浓度是多少啊？是铺到feeder上再加吗？

iseeyou1210

第一个feeder 太少了,第三个是feeder的长势太好了.6 `3 _$ V+ p8 S5 |; Q, D$ T
这些对ES cell的生长都不好,何况ips细胞.