我做的“ips”，请战友们指点（附图）

小刀

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/ v& u# H- W+ Z0 t+ z# r! @做了大概半年的ips诱导。总之很是不顺利。现诱导四十余日，图片如下，望前辈战友指点
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( s8 A" U! Z; X- H- u8 d   诱导体会：) F" K* m0 S1 w9 d% e
   1。在诱导过程中大约二十五六天时感觉镜下可见克隆特别多，但是，没几日，克隆就会迅速减少。我是隔日换液，考虑可能因为换液不勤导致克隆分化& q, V' C, `! A( J$ [* g
   2.MEF 处理后，细胞生长速度仍然较快，于是就产生了，大量MEF生长的状况& |4 b3 K; n! `* C" u# q' |% i' ^+ l2 P
   3.貌似的小克隆总是不见其生长扩大，不知道原因为何？莫非不是？

小刀

另外，ips是不是如昙花一现般的即将谢掉了啊？
) a7 A) u3 o( Z0 }+ I$ T前辈们请高见！

daviehe

顶楼主

fish_zbw1985

有没有做过AP染色或活细胞染色呢？

双刀

做的是人的吗？

双刀

有没有其他照片？怎么大的克隆只有一个？

wangzhuo822001

MEF 处理的丝裂霉素浓度是不是不够？或者是MEF 细胞浓度太大？

wangzhuo822001

还有就是是不是丝裂霉素作用时间不够

anxjs

看你图片，诱导40余日，饲养层居然还有这么高密度，特别是第三张，有点问题啊。MEF处理后还会生长，肯定是丝裂霉素没处理好，我们丝裂霉素浓度为10ug/ml，T25瓶子长满MEF后我们按4ML的液体量MC的，处理2.5h，如果MC配好后很久没有用，最好再摸下时间，可以适当延长30min。克隆多的时候可以挑几个做下AP染色，确认下先。

hansey

你的MEFs还不错，是因为MEFs还在生长的原因吗？