HMSCs的P0 失落中望指点

kqyy

小弟最近一直失落在HMSCs的P0中，目前抗凝剂从EDTA改为肝素后，基本可以见到比较多的帖壁细胞，第三天初次半量换液可以见到5个左右的集落，原代第6天第二次全量换液见集落变大,但是整个瓶底除了几个大的集落外几乎什么都没有,并且集落上面比较脏.
1 {3 w% n/ o# @2 ^     问题:& P. R6 D% }# d; `$ }
          1:为什么细胞分布不均) W, X; Q6 M3 c, t
       2:集落上的脏东西可以用PBS用力充下来吗
  p( t  |- e* _. [       3:大的集落怎么处理,是等到整个瓶融合到80%传代还是先消化集落
# j: o! N7 K5 Z. N% s       4:玻璃瓶不加明胶影响大吗

kqyy

[img][/img]

kqyy

hcoohboy

最好用新的塑料瓶；从你的图来看，你的问题在于接种细胞密度过低，由于骨髓里有大量的造血细胞，所以你接种的时候细胞密度要大于1x106个/cm2。- W4 R* n0 f2 }* t1 p
大的集落最好挑下来放到孔板里扩增，MSC对于密度很敏感，密度低了几乎不再生长。

missyoudad

学习了

zhangl

不是说接种密度低时细胞不容易老化吗？（文献报道）

nobelmao

但接种密度低相应培养时间会更长没有扩增到需要的数量就会老化啊

zsc78

人的骨髓供体年龄非常重要，最好是年轻的。如果不是必须，五十岁以上的供体最好不要，分出来的效果也可能不太好。

Robert-A

原代的细胞里面含有杂细胞是正常现象，传代后就好了不用担心。

helenkim

原代msc培养一般是什么时候换液，48h还是72h，是换全量还是半量呀！谢谢了