COVID-19检测小贴士

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COVID-19检测小贴士1 P4 _$ d3 f* x
来源：生物谷 2020-02-24 08:20$ [1 C, h4 \* d6 a) d8 l+ X1 _4 j
为了支持新型冠状病毒（COVID-19）的检测及疫苗研发工作，美国疾病预防控制中心（CDC）和中国政府都已完成了新型冠状病毒基因组的测序并将结果提交至US NCBI GenBank®数据库 [1]。近日，IDT收到了来自世界各地研究人员关于新型冠状病毒检测试剂盒的询问，以下是部分简要说明。
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; i0 @- n; P7 h, i) s1 d美国疾病预防控制中心8 }# v1 L5 v6 b
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美国疾病预防控制中心检测试剂盒* 靶向COVID-19核衣壳蛋白基因（N-基因）上的不同位点。该试剂盒中的3组引物/探针必须与靶向人RNase P基因的内部对照同时运行。每个患者样本共需进行4次qPCR检测。
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1.该检测试剂盒采用一步法qPCR反应（即逆转录和后续qPCR反应在同一步骤中完成）；
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2.所有3次N-基因检测只有在Cq <35时方可视为阳性结果；! E5 M1 `# X$ T7 A4 o" Z4 Z

& X: g$ k0 I9 B0 S3.RNase P内部对照反应是关键。Cq >35表示样本提取不佳，需要重复实验；' V6 m0 m/ K  d2 v
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敬请查阅最新的美国疾病预防控制中心 COVID-19 RT-PCR检测方法实验室指南，获取相关文档及实验方案。& b# B' j9 }+ q5 A9 ^: e! Z
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与其他检测试剂盒的比较
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世界卫生组织（WHO）
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世界卫生组织实验方案不同于美国疾病预防控制中心实验方案。世界卫生组织建议需进行3次qPCR反应来确认是否感染COVID-19。尽管这是一套完整的实验方案，但没有美国疾病预防控制中心检测方法来得快，因为它需要连续进行3次检测，且必须观察到阳性结果才能进行下一次检测。该实验方案按如下顺序进行检测：5 V# @. ]$ _# M: q  q% H$ y8 m& s
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1.冠状病毒E-基因' P' f. Y0 w8 \  Q# w
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2.RdRP基因：针对SARS 冠状病毒和其他蝙蝠相关冠状病毒, m. c4 c8 A6 K! y
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3.RdRP基因：针对COVID-19
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( {  m+ T+ ^7 R* y, V3 Y中国疾病预防控制中心, x' g) b& f8 C* E9 q
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中国疾病预防控制中心检测试剂盒建议采用2组引物/探针。第1组靶向ORF 1ab，第2组用于确认COVID-19的N-基因。& d, L" _8 T+ I" I6 F

: c2 l( B8 J; H+ j0 W: K1 Q对照组
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初步的电子模拟分析表明，搭配使用 IDT N-基因阳性对照组模板**与美国疾病预防控制中心检测试剂盒，与使用中国疾病预防控制中心、泰国卫生部以及HKU的引物/探针组进行类似实验获得的结果相符。当然，这是基于电子模拟研究，建议用户在自己的实验室中对所选试剂盒进行验证。
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6 B' R: F. T- s2 |8 f5 |如需了解更多信息，请登录www.idtdna.com/pages/landing/coronavirus-research-reagents0 u0 c$ d  Z  e* [9 x

' y& w$ X% N9 `9 ]参考文献, u" a& j0 }9 A: p" u

; O8 _, @) Z) G/ [0 X5 W1.(2020)2019 Novel Coronavirus (2019-nCoV)， Wuhan， China. [Online] US Centers for Disease Control and Prevention. [Accessed 28 Jan 2020].* b: J: h0 S7 U  u' r/ j* @1 y
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* IDT并非、也未声称是美国疾病预防控制中心冠状病毒引物探针序列的主要、首选或推荐供应商。IDT可独立提供CDC公布的用于冠状病毒检测的引物和探针序列，订购非常方便。. |# u0 R& r" M

. E' {/ O6 Z  p. R" N% {4 b7 V& |** IDT对照并非由CDC设计、检测和验证，也未得到CDC或其他公共卫生机构的认可。这些对照由IDT单独设计，针对SARS、MERS和COVID-19的核衣壳蛋白全基因，是为了方便客户而提供的。如果用于解释检测结果，最终用户应进行对照验证。
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