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官宣!冻存的人原代细胞上市了!

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发表于 2020-4-7 18:04 |显示全部帖子
本帖最后由 加拿大STEMCELL 于 2020-4-9 10:57 编辑 5 L8 A/ L9 \+ o, b2 b" R
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人原代细胞是直接从包括血液和骨髓组织分离的细胞。这些细胞在生物过程、疾病进展和药物开发的研究中非常重要,并可应用于体外细胞实验、人源化小鼠建模及异种移植。与建立好的细胞系相比,原代细胞保留了起源组织的关键特征,更能准确地反映供者间的固有变异性,包括HLA类型和CMV状态。使用原代细胞提高了细胞培养系统的生理相关性,得到的实验结果更具有体内预测价值。
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3 j1 _! \) x/ p8 M' {

凭借在细胞分离和细胞培养试剂开发方面20多年的专业知识,STEMCELL Technologies旨在支持您研究工作流程的每个阶段。现在我们已经准备好了,为您提供多种从脐带血和外周血中分离的冻存人原代细胞!

可提供的细胞类型(健康/正常供者)" |/ g! ]6 S0 D( x: \

  • 单个核细胞(标准、具表征)

  • 纯化的细胞亚群,包括:

    , {) i/ Z6 ?. z4 I8 O

         CD34+细胞

         T细胞

         自然杀伤性(NK)细胞

         B细胞

         单核细胞

         其它细胞类型

具体产品信息请点击这里查看。
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实验成败,始于这关键的第一步
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高品质 - 高复苏率、高活率
  • 如果产品说明书标示原代细胞数量为1 x 10^8 cells,按照产品说明书操作即可复苏得到1 x 10^8 cells。
  • 所有的原代细胞都通过EasySep™无柱免疫磁珠细胞分选技术进行分离,并冻存在CryoStor® CS10中,以保证细胞活性。
  • 我们对细胞的冷链运输过程进行全程的温度监控,并提供全程温度监控的记录,确保细胞品质。4 B( V$ p; l; E* S+ O) Y

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合规 - 可提供您所需的文件

所有人原代细胞产品均在具有知情同意书(ICF)及食品和药物管理局(FDA)或机构审查委员会(IRB)批准的方案进行采购,确保个人信息和供者匿名保护。捐赠在美国进行,并依据适用的联邦、州和地方法律、法规和指南。供者的一般健康状况和病毒状态,包括HIV-1、HIV-2 、乙型肝炎和丙型肝炎均有经过预先筛查。可根据要求提供额外的筛选或分析。我们的质量保证、质量控制和法规事务部门随时准备为您提供必要的文件,以满足特定的机构要求,包括供应商批准,以便于采购。
* S% y# F( @2 j, c  n  E此外,细胞附带有质控的分析结果证书,包括细胞计数、活率和纯度。STEMCELL的质量管理体系已通过ISO 13485医疗器械认证。
* [; h* |1 j* y; `) V0 K- W" a* _
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灵活 - 提前测试并为您保留批次

在使用人体生物材料时,供者或样本收集之间存在差异是正常现象。实验开始前,您可通过预订整个同一批次的冻存细胞,并对该批次进行测试,以减少预筛选不同批次的细胞所耗费的时间及精力。此过程可确保您使用首选细胞批次进行下一次实验,而无需再次进行预筛选。
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技术支持 - 即时,可上门demo您收到细胞后,需要任何的技术指导,如化冻、复苏等,我们均可提供上门服务,以保证您可获得最高质量的细胞。此外,STEMCELL也提供专业的细胞培养及细胞分选技术,以支持您更好地开展下游细胞研究。: X$ Z( k% ~2 f0 Y# h8 R. @
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个性化 - 定制您的筛选条件STEMCELL可根据您的要求进行个性化定制,用于非标准细胞类型或进行具有特定要求的采集。我们能够定制满足您特定研究需求的产品:
  • 特定的供者条件和筛查需求 - 基于性别、年龄、种族、HLA类型、疫苗接种情况、ADCC状态及其他条件


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  • 可定制细胞类型、规格和样本量


    * P' l1 d5 u. m4 s5 U
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实验数据

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图1. 冻存的Pan-T细胞在激活后分泌IL-2

通过EasySep™人T细胞分选试剂盒(产品号 #17951)从白细胞单采术样本中分离的新鲜T细胞或者冻存的Pan-T细胞(产品号 #70024)ImmunoCult™-XF T细胞扩增培养基(产品号 #10981)中培养。细胞分别在添加或不添加ImmunoCult™人CD3/CD28 T细胞激活剂(产品号 #10971)的情况下培养48小时后,使用人IL-2 ELISA试剂盒(产品号 #02006)对不同条件下细胞分泌IL-2的水平进行检测。结果表明新鲜分离和冻存的纯化T细胞在活化后分泌相似水平的IL-2。

*对照组的IL-2浓度低于检测最低极限值。

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图2. 冻存的单核细胞分化成树突状细胞并在激活后分泌IL-12(p70)和IL-23
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通过EasySep™人单核细胞分选试剂盒(产品号 #19359)从白细胞单采样本中分离新鲜的单核细胞或使用冻存的单核细胞(产品号 #70034)在含有10%FBS、0.1mM MEM非必需氨基酸溶液(100X,产品号 #07600)、2mM8 }, ~+ n/ ^( V! O
L-谷氨酰胺(产品号 #07100)、1mM丙酮酸钠和50μM β巯基乙醇的RPMI 1640培养基(产品号 #36750)中培养6天。在第1、3和6天加入人重组细胞因子IL-4(产品号 #78045)人重组细胞因子GM-CSF(产品号 #78015),将单核细胞分化成树突状细胞。将细胞保持未激活状态(对照)或者用LPS和人重组细胞因子IFN-γ(产品号 #78020)进行激活。分别使用人IL-12(p70)ELISA试剂盒(产品号 #02014)IL-23 ELISA试剂盒(产品号 #02016)对单核细胞分泌的IL-12和IL-23进行检测。结果表明,激活的单核细胞分泌(A)IL-12(p70)和(B)IL-23,而未激活的对照组中未检测到IL-12和IL-23。

*对照组的细胞因子浓度低于检测最低极限值。


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图3. 冻存的B细胞具有高活率并且在刺激后产生IgG抗体

(A)在CryoStor® CS10(产品号 #07930)冻存的B细胞(产品号 #70023)在解冻后具有高活率(平均值 = 96.3 ± 0.6%,n = 6)。(B)将B细胞在含有10%FBS、2mM3 o- M( D! {( V$ k4 ?8 y
L-谷氨酰胺(产品号 #07100)、10mM6 K* y7 ]8 O8 D2 d" z; E! K
HEPES(产品号 #07200)和55μM β-巯基乙醇的RPMI. l1 T' s7 e; S" H4 B
1640培养基(产品号 #36750)
中培养1周。在此期间,细胞保持未激活状态(对照)或在具有IL-21的条件下使用CD40对细胞进行激活,随后通过ELISA检测IgG抗体的产量。结果显示,相对于未被刺激的细胞,激活的B细胞可显著产生更多的IgG抗体。

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原代细胞复苏窍门; T( b! @/ ^4 _
当样本被反复冻融时,有时会呈现“团块状”。这是因为外界压力加速细胞死亡,从死细胞中释放出来的“粘性”DNA分子将邻近的细胞粘合在一起,从而产生了细胞团块。# }$ @  d* I* ]8 E9 c6 m
在样本中加入脱氧核糖核酸内切酶 I(DNase I)可以减少DNA悬浮碎片和细胞团块。现今有许多使用DNase I以减少细胞团块的有效操作方法。我们推荐在细胞悬液中加入DNase I溶液(产品号 #07900)至终浓度为0.1 mg/mL(或200 Kunitz units/mL),并在室温孵育15分钟之后进行下游应用。
6 `5 m6 Q8 a& U! G下面复苏冷冻样本的方法描述了使用DNase I减少细胞团块的操作步骤:1. 在37°C水浴中快速旋转冻存管。将解冻的细胞转入一个灭菌过的50mL圆锥管。可选择:在圆锥管中加入0.25到0.5 mL初浓度为1 mg/mL DNase I溶液,然后再将解冻的细胞转入管中。

2. 用1 mL含10% FBS的培养基或缓冲液(例如PBS或者HBSS)冲洗冻存管,以收集管中残留的细胞,然后将培养基或缓冲液转移到新的试管中。

3. 缓慢逐滴加入10-15 mL的含10% FBS的培养基或缓冲液,同时缓慢摇动试管混匀。

4. 用含10% FBS的培养基或缓冲液补满50 mL试管。

5. 室温离心,300 x g;10分钟后收集细胞。

6. 小心地弃去尽可能多的上清液,尽量不要搅动细胞沉淀。轻轻敲打管壁来重新悬浮沉淀。

7. 如果细胞悬液看上去混浊,计算达到终浓度为0.1 mg/mL所需的DNase I,逐滴加入DNase I并同时缓慢摇动试管混匀。在室温下孵育15分钟。

8. 加入25 mL含2% FBS的培养基或缓冲液,轻轻倒置试管混匀然后离心(转速和时间与上面的步骤相同)。弃去尽可能多的上清液然后重新温和地悬浮沉淀。

9. 如果细胞悬液看上去仍然混浊,使用一个30-70 μm的细胞滤网过滤样本并移入新的试管中。使用含2% FBS的培养基或缓冲液洗涤试管,然后使用细胞滤网过滤,重复三次。

10. 得到的细胞悬液可以进行细胞计数和之后的下游应用,例如细胞分选。请注意:如果是对DNase比较敏感的下游应用(例如造血细胞集落检测),进行细胞计数前再使用适当的检测缓冲液洗涤细胞一次。
$ g! H9 \  F2 I8 T若您有任何关于人原代细胞的问题,请直接通过400-885-9050与我们联系!
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