细胞增殖检测指标

smiling

各位同仁：
! o. Y- T7 D; a7 |# {请问目前大家用过的比较好的细胞增殖能力的检测方法有哪些？
) Y# b; x- }0 ]: p, V8 D大家都来谈谈吧

Iris

细胞生长曲线，MTT,CCk等。
7 p$ m+ ?1 ^9 \细胞分裂指数，细胞周期的分析等。

smiling

回复 2# Iris ' g0 {9 k& X# K$ r% g) |+ \
我看到有检测PCNA的   但是不是很清楚 ，不知道有什么经典的方法

xbs530515

用的最多的，MTT，同类的有CCK8，不过更贵。
% L. K/ \+ h4 A) g% I6 \& O/ k苔盘蓝计数，不过操作麻烦。

shinegene

MTT

farmer

克隆形成实验。

ivantanqi

克隆形成实验不是用来测细胞增殖能力的，& L/ N* ]1 y' l. A/ F* X- e. J
现在我们实验室做细胞增殖实验，主要用Cell Proliferation ELISA, BrdU的方法来测，具体可以见
2 C) V" n  K' o: b5 E) L Cell Proliferation ELISA, BrdU.pdf (61.78 KB)

2010-7-29 17:18 上传

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" d# w; v3 r7 K  D. \% }还可以用alamarBlue assay,4 D9 N% \. U) l6 g
都是非常好用的assay,4 \4 U' M' }) _$ K+ u9 ~
大家提到的MTT我觉得已经过时了，对细胞的损失和准确性差都是其缺点。

btyou8u

现在使用的是CCK8，不过要求细胞计数准确，因为每孔细胞接种数不会太多

大海

细胞增殖检测方法：总论，3HMTT检测法主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法，其原理是在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解成兰紫色的甲(Formazan)生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团。
" Q2 `1 b. b5 l& d9 F$ o一、胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）渗入法
1 h/ ~8 }* j% g# z胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的碱基，也是DNA合的必需物质。用同位素3H记TdR即3H-TdR作为DNA合的前能掺入DAN合代谢过，通过测定细胞的放射性强度，可以反映细胞DAN的代谢及细胞增殖情。但是具有放射性。
' B8 @4 S" M7 }0 l" u6 o' O4 O二、MTT检测法5 C- z7 `/ w0 h% _" l0 C7 Q5 u% j" }
MTT检测法反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法，其原理是在活细胞生长和增殖过中，线粒内的脱氢酶可将黄色的MTT分解兰紫色的甲（Formazan），生的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力正比，同类目前常用的有cck8法，更方便，准确。) b" M0 Y& ?6 Q1 s" ]
三、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）检测法
4 O4 s0 j! J4 b3 z) ?羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，使C E为一种良好的细胞记物。CFSE进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时，CFsE记荧光可均分配至两个子代细胞中，此其荧光强度是亲代细胞的一半。这样，在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈对递减，利用流式细胞仪在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析。
: L2 x% C; N- X四、Brdu检测法
: s, [( f$ ^* s% u/ l) GBrdu中文全名5-溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合期（S期），活注射或细胞培养加入，而后利用抗Brdu单克隆抗，ICC染色，显增殖细胞。同时结合其它细胞记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研细胞动力学有重意义。
3 X" Z9 H- }) w/ e2 U4 `$ I我们用的是cck8检测方法，比较方便，结果大家还认可。

wang3033

8 P$ D" E$ w# w2 ~5 @
& F9 d' n, `  G% W1.目前最好的还是用流式细胞仪观察细胞周期，因为细胞量大，比较客观1 F" ]4 m0 d4 [5 l. k
2.上述其他学者讲的都可以用，也比较简捷，