小鼠BMSC原代培养老化？

angel-sakura

回复 10# xihuzi0217 8 ?  \" _& k. ~0 j' e! t
: A8 S2 ^% t4 G. q6 B1 R, M6 ?+ V
请问你刚分离出来后是24h后换液，还是3d再换液？里面的红细胞等杂细胞会不会干扰BMSC的生长？

透明微笑

3d再换液

helen841102

3天换液

alioli

我也养过小鼠的BMSCs，感觉首先小鼠要选取年龄比较小的，2-3 周的比较好；二是在取骨髓的过程中速度要快，要不细胞状态不好；三是血清浓度最好稍高一些；四是BMSCs密度依赖性较高，所以接种密度要高一些。以上仅是个人意见，望参考。

angel-sakura

回复 14# alioli
: a1 f7 T/ j" B9 z$ j& y; F关于后面2个建议，血清浓度超过10%的不是会诱导细胞分化吗？7 t! E, V' p5 P3 v/ F5 V
此外，BMSC接种密度高一些的话不是会接触抑制吗，也会造成细胞分化或老化啊。。。求解

lili9999

我知道做一次原代细胞培养挺不容易的，看里面还有贴壁的细胞，可以先观察换液看看。因为你没分离，有很多细胞是不贴壁的，自然就被换液换掉了，如果留下的细胞还可以，那就继续养。可以先将培养基放入孵箱里预温。建议下次换细胞分离液分离纯化细胞试试。

angel-sakura

回复 16# lili9999
8 m  i& K+ Q$ [1 ^$ I$ ]谢谢，之后我继续养了几天，但细胞仍然没好转，后来经衰老染色结果发现都老化了，我做的课题与分化有些关系，全骨髓法分离的BMSC具有较好的分化潜能。

dingyx2009

我也怀疑是你换液的问题。在我们实验室尤其是原代培养不主张全量换液，更何况在培养24小时后，细胞对生长的微环境都有个适应的过程。一般的在换液前将培养液置室温20分钟左右或37度孵箱孵育10分钟（最少少用对孵箱不好），1/2或1/3换液，2－3天换一次。

bypw

从你的实验步骤看视乎没有什么问题啊，换液时间也没有什么可以疑问的，在最初原代细胞几乎都需要4-7天不等的时间细胞才可以换液，年龄视乎也没有什么太大的问题，在做一次看看，注意不要污染。在看看吧，一次不好说啊

douchong

血清也不是很好啊，我们都用GB的, s7 l1 p$ K& q% r9 b" C
5天换液，时间有点长了，可以试着加点细胞因子看看