小鼠BMSC原代培养老化？

angel-sakura

下面第一个图是我原代培养小鼠BMSC第5天照的，发现能形成明显的colony，但2天后我再去观察的时候细胞开始变得扁平，空泡化，漂浮的死细胞很多，有的甚至整个colony都飘起来了。
1 W2 a0 b  S& }7 _, r我用的是全骨髓法分离的，未离心，培养基是LG DMEM+10%FBS（四季青），分离取的是小鼠一侧股骨，贴壁24h后全换液，接着5天后再换液，第7天就变这样了。今天我将细胞传代了，但不知道还能不能活。请问一下各位我操作的哪个环节有问题，谢谢！！
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zhanglixin522

我觉得细胞不纯，杂细胞挺多，形态都不太对，有点老化的迹象，传代后状态也不会变好的，再重新做一批吧！

圣牛

感觉你的细胞状态不好，我养的是猪MSC,但也遇到过这种情况，就是细胞呈多角形发展，胞质内出现颗粒状物质。包膜边界不清晰。贴壁细胞高倍镜下看，有很多已经死亡，细胞呈崩解装。请教别人说这是细胞老化的现象。原因有很多，有的是污染问题，有的是细胞本身状态不好。感觉你图中细胞多向视野中央聚集，可能在传代时充分混匀培养皿，使大量细胞聚集叠加在一起，从而影响了细胞的营养状态。故出现细胞状态不好，呈老化或死亡状态。

angel-sakura

回复 3# 圣牛 ' M: Y8 B! I& H$ s6 M; c
会不会和我取材小鼠的年龄有关系呢?我取的是成年的小鼠骨髓。

zhanglixin522

也有关系的，实验动物不要太老，会影响干细胞的数量和质量，我认为通常以4-6周龄的小鼠为好。

透明微笑

培养的状态不好。
4 H) {! w0 Z* c) D) I8 n: ]一般选择2-3月以内的小鼠状态都不错。
/ q! A* ?! e& {. h  R$ R4 Z培养基是否有问题？

wgydys

1.感觉细胞状态不好，似乎有点老化迹象，可能和加血请促进分化有关
# h0 r! r8 O' [/ Z2.建议加入细胞因子

angel-sakura

回复 7# wgydys
7 g6 P! {" L  h7 v" H2 U" M4 c: ^ 请问你养的时候是不是不加血清而只加细胞因子？

helen841102

我也遇到过  可能是老化

xihuzi0217

我也是刚刚开始养小鼠的骨髓间充质干细胞，感觉好像是你换液的问题，间隔时间太长了，最长不能超过三天。而且培养液最好从冰箱中拿出后在无菌环境下放置十几分钟，有条件的话最好37度水浴复温一下，这样对细胞影响小。