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| 我现在在做SD大鼠的骨髓间充质干细胞的原代培养，以前没有经验，刚开始摸索。我按照全骨髓贴壁法分离MSC，然后原代培养，3天首次全量换液，以后每2天换一次液，培养液为LG-DMEM，10%FBS，双抗。一共进行了两次，第一次细胞很少，现在已经15天了，大概有两三个视野下（20*）有较密集的细胞，细胞呈单层铺在培养瓶底部,10*倍视野下，细胞呈梭形，其他区域基本上都是小的圆形（20*）。第二次试验我提高了接种密度，其他不变，现在8天了，细胞比上一次多，换了两次液以后，镜下观察细胞数比较多，基本上是单个的圆形，体积较小，中间夹杂体积相对较大的圆形细胞，也可看到部分细胞呈梭形或多角形。现在的问题是，我查阅文献大部分报道是14天左右细胞就可以铺满瓶底，可是我的细胞最多的已经15天了，还是只有少数有典型改变，大多数是圆形。是什么原因，另外还有再继续培养下去的必要吗？第二我想问一下BMSCs原代培养的细胞一般要多久就能达到传代的要求，是不是只有梭形的细胞是MSc，那些圆形的是不是，是不是大部分细胞都出现成纤维样生长，且铺满瓶底80%以上才能传代，还是只要是细胞长满，不论什么形态都需要传代。本人是新手，问题可能比较外行，希望有经验的大侠能不吝指教！谢谢 |
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发表于 2010-5-21 00:02
发表于 2010-5-21 20:19
