feeder cell 消化问题 成团下来

xjya

回复 9# youyou315
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    1% gelatin 4度过夜或37度培养箱内2小时

xjya

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    打错了,是0.1%gelatin。还有铺盘的时候要混匀gelatin溶液，种细胞前将gelatin吸干。不过你说的问题之前我没有遇到过，只是提供信息供你参考

ruofan1982

我是0.1%gelatin包被10分钟就可以用了

大猪小猪落玉盘

那种东西到底是什么细胞分泌的？什么成分？本人在传代过程中也经常遇到。

esc123esc

我也是出现一样的情况，消化下来的都是成团的MEF，吹不散，不能形成单细胞，有时候连在一起絮状的一片片的吹不散，不知道怎么办，传下去之后局部会一大团，很头疼这个问题啊，我用的也是0.05%的胰酶啊，自己配的，不知道是不是自己配的胰酶有问题啊，大家都用的是买的成品吗，还是自己配的啊胰酶

exin11

其实有时会成团，吹打不开的～你要看细胞状态而定。传代时，稍微的稀一些（可也别太稀，那样长不好），一代的时间，以293T细胞看约为两天，就得传，时间长后，会成簇，非常不好吹散～～& X; R* ?* H% v! e; i# `" c5 P6 D
还有就是成簇可能是因为你的酶活性不好，酶不要反复的温度变化，那样就不好准确计算其中的浓度，这样影响消化结果～～

dilal

我也遇到了楼主的问题，消化时大片的膜状物脱落了下来，感觉像是MEF分泌的一层膜样的东西。消化时不能过度晃动细胞瓶，最好不要拍打细胞瓶，这样就很容易形成絮状物。但是我们消化明胶铺板的MEF时，就没有出现这种问题，也不知道是什么原因。最好是让胰酶消化时间足够，使细胞自己悬起来比较好。