脐带原代培养15天后，干细胞爬出来了，但是在20天左右，细胞死了

大海之家

如题，第一问题是，脐带原代培养耗时过长，酒精处理了超过5分钟，还浸泡抗生素生理盐水混合液20分钟，不知道这是不是细胞爬出较慢的原因。
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) M& p6 K0 C4 S第二个问题是，细胞爬出后，在脐带培养的20天左右，观察到细胞全部死掉，9个培养皿。7 M; X7 S1 u3 v+ a; f- k
用的是longza培养基，测了PH值，6.98
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7 K! A; b8 n' C- k& D' W+ q/ ?求大神们帮忙分析下，谢谢。

哲野狂人

我的做法：脐带解剖前整段用酒精浸泡2分钟，之后用生理盐水清洗一遍，再用基础培养液加双抗泡着；一般在第13-15天就移除组织块，可以马上消化传代或者继续培养2天再传代，用国产的无血清培养液和含澳胎血清的培养液都可以

cb417965594

首先酒精处理超过5min肯定是有影响的，一般浸泡1-2min，然后立即用抗生素生理盐水清洗2遍，脐带也有个体差异，爬出的慢原因太多；你说后面20天细胞全部死掉，这个可能与前面就没有关系了，一般除非发生细菌污染或者培养箱出现较大异常，细胞都不怎么可能全部死掉。

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我觉得操作没问题，培养基是不是缺了东西或者忘记添加了，还有一种可能培养基加上了，细胞得不到营养就票起来了