脐带间充质干细胞培养技术交流

cb417965594

关于脐带间充质干细胞培养技术就以下几个方面与各位进行交流讨论，欢迎大家各抒己见，共同进步。+ J! X* S" z2 z* X( [  y
1、首先需要选择合适的培养基，培养系统尤为重要，目前大多实验室采用LONZA+PALL组合，培养效果较为稳定，但成本较高容易缺货；有的采用DMEM/F12+血清替代品（也就是血小板裂解物），细胞安全性较低，且培养效果不是很好（细胞形态数量），可根据自己的实验需求选择合理的培养基，大家一般用什么培养基呢。) f9 h3 K  L$ m
2、种子细胞筛选，本人也培养过很多脐带间充质干细胞，感觉个体差异还是挺大的，同样的培养方法（一般都是贴壁法），有的脐带长势较快且形态极佳，有的脐带长势较慢且形态不好，一根好的脐带能为后续实验减少很多问题，大家在脐带培养过程中也是这样吗？个体差异大吗？* z0 N5 F$ \" D8 y9 g
3、注重培养过程中的细节，严格按照标准参数进行操作。有的人说胰蛋白酶消化那一步很关键，但是我试过很多次，消化时间在8分钟左右，后续传代扩增一点问题都没有，细胞活率也不会受影响，但是一般还是控制在3min内，以细胞开始脱落为准，减少不必要的风险。离心参数也是，一般都是1200rpm-2000rpm，3-5min,细胞都不会受什么影响；细胞离心后弹散是必要的，但是必须轻柔，亲身经历因为弹的过重，导致细胞活率降低，细胞冷冻过程也极为关键的，梯度降温是最基本的方法，在-80℃冰箱里做到隔夜不隔天，梯度降温完成后及时转入液氮中，能最好的保证细胞质量。可能每个人操作习惯不一样，但是基本还是需要遵循SOP进行操作。欢迎大家分享操作中的经验和失误。8 X# p1 n- ]" [! @& G: J

hk61539326

PALL 也是血替。

zhangjieyctc

回复 cb417965594 的帖子8 {# f$ F+ t" }! n8 w7 o
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为何采用DMEM/F12+血小板裂解物，细胞的安全性较低？求解

ll254166

longza好像把培养基配方卖了，效果估计会变差，现在好像没有合适的培养液配方。

gm3771052

接种密度 也是关键点，细胞融合度不能太密