求助：VEGF的检测方法

xbs530515

请问检测VEGF的生物学活性除了采用HUVEC活性抑制实验，还有其他更为简洁的方法吗？

ambassador

在网上找到的两种方法：' S& h* Q! [5 B! q; R) n! D
1．血管内皮细胞增殖试验  用AEC或人脐带静脉内皮细胞(HUVE)作为靶细胞。0 E  u% `: ^; ?
    (1)于12孔细胞培养板每孔中加入1X104／0．5mLAEC。% A5 t! O0 y. H* l* b( z. }
    (2)用含0．2％明胶的PBS系列稀释待测样品，每孔加0．5mL，以后隔天更换同样浓度的稀释样品，对照孔加0．5mL细胞培养液，置37~C，5％C02条件下培养4～5d。2 W2 i0 J$ T6 Q& o+ c. A8 f; ^
    (3)采用MTI法、3H-TdR掺人法或直接计数法检测生长的细胞，绘制剂量反应-曲线，取能诱导50％最大增殖反应的最高样品稀释度为IU VEGF。1 a: a3 X4 [' e  F! V- p

8 y. F) {: A" T% b; }    2．血管通透性活性试验  VEGF可诱导血管通透性增加，血液中结合染料的蛋白质从血管内渗漏到组织中，形成蓝色斑点。可采用动物体内试验方法测定其增加血管的通透活性，具体操作步骤为：% r  g* y! o2 U: ]
    ①取剃毛的豚鼠，麻醉后心内注射lmL0．5％伊文思蓝染料；
# X0 d# R7 J8 g    ②用PBS系列稀释待测样品，取0．2mL注射于豚鼠背部皮下；
9 U. r  |9 |; x4 y    ③1h后观察注射局部蓝色斑点的范围蓝色斑点的范围与血管渗漏的程度以及VEGF的量成正比。