请教：细胞形态的问题。

zzp40

我养的细胞也出现和你相同的情况，我的血清一直用的是相同的，不知道是什么原因，期待高手指点

wshzhoum

回复 10# missyoudad
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3 e" R* R& V9 |% n/ h    干细胞一般比较娇贵，不推荐用国产血清啊~以前我就生生的用四季青把一批脐带干给弄死了。。。。看你的图片，貌似接种密度不是很高，可能是这个原因造成细胞老化吧。。。

圣牛

从传代后第7天的照片看,应该是典型的细胞老化现象,(细胞呈崩解、边界不清、胞核附近微粒体增多等)我养的猪MSC也经常碰到这种情况/$ v7 S& e& r; l/ s6 v7 x* S
感觉原因很多:有1、培养环境不好如温箱湿度、温度、有无细菌污染、培养液营养状态如何等。2、细胞自身的原因，如经过反复冻存、复苏、细胞损伤大；细胞提取 时操作不规范有污染等.4 `& n9 Z/ K7 s# X
根据你传代后三天的照片来看,贴壁细胞占大约30%左右,是不是由于传代是密度控制的不够好,导致密度过低, 细胞数量太少.分泌的生长因子不足等等,所以始终细胞状态不是很好.建议控制传代时的细胞密度。   参考一下

zhmgeneral

我觉得应该是你消化的时候消化得太狠了吧？你看传代后7点的细胞，和我们实验室平时消化过度的细胞好像哦

decloud2009

你这个细胞跟老化也不像啊，我养的细胞在老化的时候，细胞会越来越大，越来越扁，然后触角也多多的。9 [/ r/ g5 j" X4 D, U
4 C* |4 w' R/ G9 [. w8 e
但是你这个细胞太不规则了，从来没有见过，不像分化，不像老化。

rzdongdong1986

是啊，PMSC培养过程必须万倍小心，最好用进口的FBS

meirongwan

细胞密度太低所致

askage

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最后张图上展现的那些大型无规则边缘细胞应该是传说中的mMSC（more mature MSC).国外有些文献叫做RS-1C(still wider, spindle-shaped cell)或者type II(?可能是RS-1B).在以高密度传代时候，RS-1C的所占比例会超多，远远超过RS-1A（thin,spindle-shaped cells）,RS-1B(wilder,spindle-shaped cells)（这两类分化增殖能力都超过RS-1C).RS-1C有点分化增殖能力。国外学者研究发现：在以低密度传代时（10-50个/CM2）,RS-1C同样会长的有，比例少而已。低密度传代RS-1A,RS-1B这两类细胞可以占到6-7成，传代时汇合度不宜过高，适宜的是50-60%,高了也容易使其损失增殖分化能力。有文献把RS-1A称为更早期的祖先细胞，从这个角度来看，RS-1C的出现是培养条件、时间所致，细胞由小青年变成了中年。

askage

其他文献一些表述、称法：RS-1(small and agranular cells)    RS-2(small and granular cells)   mMSCs(large and more mature cells)   还有一类very small round cells that rapidly self-renew(这类细胞都成双存在，双联体细胞)。

静--静

本人意见：细胞现在的状况有一下几种可能。1.传代时候的胰酶消化时间过长对细胞有伤害2。传代所种密度有点稀疏，导致细胞无法依附生产，以至于发生分化。建议下次传代的时候如果细胞状态不好，可以高密度传代比如1:2或者1:1