求助关于原代细胞的传代

Sophia

: j! Y1 h  d6 Y, I

7 Y: t1 @9 G2 D# ?今天，进行原代细胞的传代，胰酶消化1分多钟，后来发现大量细胞都没有消化下来，于是又消化了一次，细胞虽然变圆，但仍然紧紧贴壁，约10分钟，仍有大量细胞没有消化下来，换用了一瓶胰酶，仍不管用，最终也没有找到原因，因此，在这里求教一下，望各位多多帮助！

liulilin

关键看是什么细胞，还有胰酶的用量，正常情况6cm皿 400ml , 10cm皿 800ml  ，消化3分钟。  还要 消化前，务必要用PBS清洗，目的是洗去培养液中残留的FBS，。

xjya

1. 要清洗,PBS洗一遍,以去除血清. _6 M7 ^& T+ a8 [
2.量要够,一般正好盖住瓶底就可以
6 c# k! y+ }; u2 _3.消化时间和温度要合适, X" x7 v) k& E( f
4.可以适当吹打+ v. [0 G) d  s
5.胰酶不要反复冻融,4度保存不超过1周.

angel-sakura

我养原代的时候也是出现这种情况，后来衰老染色发现是细胞衰老或死亡了，所以贴得特别的紧，不知道你养的细胞是不是和我的一样

cortex

% W5 `( A3 a4 s

9 N. i6 h: W# Y这个与很多因素有关：
4 K! E/ J* z* e4 j# Q/ b1 胰酶浓度! v# E5 g5 G& D5 g$ ?8 h" `
2消化时的温度
7 D, o1 j" w+ A  D  `* Z3细胞种类  c( g( ]% n, i3 r$ a# `+ l$ D
。。。。。。& M# l6 {) @$ ^/ t9 n- `, Z1 _3 D( G
消化时，出现你说的情况，细胞变圆时，拧紧瓶盖，用点力拍瓶壁，也有助于使贴壁细胞悬浮。

liufengchampion

这应该和细胞的类别有关系,如果是人的成纤维细胞的话,原代确实是挺难消化的.我们一般是将PBS和胰酶放37度水浴十分钟,效果不错

Sophia

非常感谢各位的意见！我养的是SD大鼠的骨髓间充质干细胞，同样的条件和细胞，另一个同学的就没有出现这种情况，真是奇怪！

透明微笑

1、大鼠的骨髓间充质干细胞贴壁不是很紧的，应该很容易消化下来" s, K) Z, S9 }9 d& Z, e2 i: G# g, f
2、可能是胰酶的问题，0.25%的胰酶可以
/ _/ o6 ]  L3 ]  t3、放在培养箱里消化
" C8 ~8 `& Q7 \0 C5 k% D6 S3 r( O4、可以细胞变圆时，拧紧瓶盖，用点力拍瓶壁

透明微笑

1、大鼠的骨髓间充质干细胞贴壁不是很紧的，应该很容易消化下来
: D; N: M* K3 E/ P9 \2、可能是胰酶的问题，0.25%的胰酶可以
: r: h% b8 S# @1 q4 y- E+ u3、放在培养箱里消化7 d3 W( W& f: d
4、可以细胞变圆时，拧紧瓶盖，用点力拍瓶壁

cony

胰酶有问题吧？