《癌细胞》：癌症免疫治疗重大发现！

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《癌细胞》：癌症免疫治疗重大发现！科学家首次证实，癌细胞PD-L1不抑制T细胞毒性，而是抑制T细胞浸润转移灶，促进癌症转移4 j, A0 x1 J3 z
来源：奇点糕 2023-03-23 10:361 V/ p3 u+ m& e! t+ t8 F8 b
这篇论文有两个出人意料的新发现：第一，肿瘤细胞PD-L1竟然不直接抑制细胞毒性T细胞的毒性；第二，肿瘤细胞PD-L1对肿瘤原发灶没有保护作用，而是通过与转移灶髓系细胞PD-1结合
+ T0 q8 G! w/ {) p0 y" q) e在PD-1/PD-L1抑制剂使用了近10年的今天，科学家竟然还能围绕PD-L1，发现刷新认知级别的新机制。
( x! o: m# s2 I近日，由美国乔治亚医学院Liu Kebin教授领衔的研究团队，在著名期刊《癌细胞》上发表了一项重大研究成果[1]。5 k* Z9 Q' ~+ F* r$ b
这篇论文有两个出人意料的新发现：第一，肿瘤细胞PD-L1竟然不直接抑制细胞毒性T细胞的毒性；第二，肿瘤细胞PD-L1对肿瘤原发灶没有保护作用，而是通过与转移灶髓系细胞PD-1结合，抑制细胞毒性T细胞对转移灶的浸润，促进转移灶肿瘤的生长。
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# N1 O( @; W/ o' M论文首页截图$ r( O( O& [, W" K0 ~0 O$ I
时至今日，我们都知道，免疫检查点抑制剂主要是通过阻断PD-1/PD-L1信号通路，发挥抗癌作用的。其中，PD-1指的主要是细胞毒性T细胞表面的PD-1，而PD-L1主要是癌细胞表面的PD-L1[2]。' T. @: r  K* U! Q* k2 M
目前对PD-1及其下游信号通路功能的争议较小，然而，究竟是谁的PD-L1在通过PD-1影响T细胞的活性，目前仍存在争议。$ \  s8 ]5 b  O
大量基于小鼠模型的研究发现，树突状细胞和巨噬细胞等免疫细胞的PD-L1，在抑制T细胞抗肿瘤反应中发挥了主导作用[3]；仅有一项研究发现，肿瘤细胞PD-L1（tPD-L1）足以抑制细胞毒性T细胞的毒性，以促进结肠癌小鼠模型的肿瘤免疫逃逸[4]。然而，人体临床研究却发现，肿瘤细胞PD-L1或者肿瘤细胞联合免疫细胞PD-L1才是预后的最强指标[5,6]。
  f  G6 b9 I8 a0 M- M0 a0 ]在Liu教授看来，小鼠研究结果之所以与临床研究不符，可能是因为肿瘤的解剖位置不同。在临床前研究中，导致小鼠死亡的大多是类似于原发肿瘤的肿瘤负担过高；而癌症患者的死亡，主要是癌症转移导致的。因此，肿瘤细胞PD-L1对于癌症的转移可能有不为人知的重要作用。
: h7 }5 T/ Y3 `9 h4 I为了搞清楚肿瘤细胞PD-L1的功能，Liu教授团队选用了4种表达PD-L1的癌细胞系：三阴性乳腺癌细胞系4T1，微卫星稳定型肠癌细胞系CT26，转移性微卫星不稳定肠癌细胞系MC38-met，黑色素瘤细胞系B16-F10。他们还基于上述4个细胞系，构建了一一对应的PD-L1敲除癌细胞系。
0 S' u0 L( \' c" A他们将上述8种细胞系分别与一个细胞毒性T细胞系混合培养，发现T细胞对所有癌细胞系都显示出剂量依赖的细胞毒性，而且T细胞和正常癌细胞系共培养还会导致双方的PD-1和PD-L1表达水平上升。他们还发现，PD-L1的表达对癌细胞竟然没有保护作用，甚至加入PD-1抑制剂也没有保护作用。
) G' ?$ u( |3 Z: |Liu教授认为，这说明在不存在肿瘤微环境的情况下，癌细胞和T细胞1V1的时候，表不表达PD-L1对癌细胞来说是一样的。其实这还暗示，肿瘤细胞PD-L1与T细胞PD-1之间的互作，可能不影响T细胞的毒性。
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7 K8 n6 g# Q( U0 h肿瘤细胞的PD-L1在体外没有保护作用" y/ z+ w$ ?2 {( ?( N5 O
那么这种现象在体内是不是也存在呢？8 P' l1 O0 [9 M  u1 |
没想到真存在。
0 `0 C  S5 \6 {# r$ \6 [无论是将哪对细胞系注射到小鼠体内，PD-L1存在与否都不影响肿瘤的大小。这再次说明，肿瘤细胞PD-L1对原发肿瘤的生长没有帮助。这确实刷新了我的认知！2 c6 k. T6 [# o1 o0 O/ ?
接下来Liu团队以三阴性乳腺癌4T1（可自发发生肺转移）为例，探索了肿瘤细胞PD-L1对癌症转移的影响。他们发现，在小鼠乳腺分别接种两种癌细胞后，表达PD-L1的肿瘤细胞肺部转移灶更多，肿瘤负担更重，而PD-L1被敲除的4T1细胞的肺转移能力明显被削弱。在其他几个细胞系中，也发现了类似的现象。) ~8 z. u( q6 C* n' [. i) R. Y& J
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肿瘤细胞PD-L1不影响原发瘤生长，而影响转移瘤的生长: o0 h5 X0 q# `, R! @/ C9 U
在随后的研究中，Liu团队证实，虽然肿瘤细胞PD-L1不保护原发灶，但是髓系细胞表面的PD-L1确实是在保护原发灶。这一发现很好地解释了前面的人鼠差异。
9 P- \2 ]9 X( ~! F$ o  c4 g确定肿瘤细胞PD-L1促进转移且不保护原发灶之后，Liu团队要解决的问题是，肿瘤细胞的PD-L1究竟是如何促进癌细胞转移的。
1 T* c! H* F2 X0 l9 l& C为了回答这个问题，他们首先比较了PD-L1表达状态对原发灶和转移灶肿瘤微环境的影响。结果发现，在接种后1天后，无论PD-L1是否敲除，小鼠肺部的初始癌细胞没有差异。他们还注意到，相比正常的4T1，PD-L1被敲除的4T1肺部转移灶CD3阳性细胞浸润增加，但是原发灶没有；如果清除小鼠体内的免疫细胞，那无论PD-L1表达与否，都能形成同样的肺转移灶。* l: n1 W) h2 E; }' k- t/ X8 A4 I
这些数据说明，肿瘤细胞PD-L1并不影响癌细胞的散播，而是帮助转移灶的癌细胞躲避细胞毒性T细胞的杀伤。
6 Y) h5 [4 {1 }% h) Q- [这又是如何实现的呢？# q- x; W: Y# X" \6 P5 r
经过一系列复杂的实验，Liu团队发现转移灶肿瘤细胞PD-L1与髓系细胞PD-1（mPD-1）结合后，会激活SHP2，下调IFN-I→STAT1→CXCL9这条会招募细胞毒性T细胞的信号通路，进而抑制T细胞对转移灶的浸润，而不是通过PD-1/PD-L1通路抑制了T细胞的杀伤力。
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& {8 h/ I3 t* j9 U( J; R机制示意图9 ^2 }, w2 v, y; {2 l, S
总的来说，Liu教授团队的这项研究成果让我们对癌症免疫有了全新的认知。让我们知道，原来PD-1/PD-L1这条信号通路远比我们想想的复杂，它的功能不仅与细胞类型有关，而且还与肿瘤的解剖部位有关。
! y1 \) I4 w8 @' j* O更重要的是，这个研究让我们对免疫新辅助和辅助治疗有了更深的理解，也夯实了这两种疗法的理论基础。% Z# \* }6 l8 f( c* o
参考文献：
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