干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
朗日生物

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 14035|回复: 8
go

[请教] 两个质粒重组的问题 [复制链接]

Rank: 4

积分
1006 
威望
1006  
包包
3851  

金话筒 优秀会员

楼主
发表于 2010-6-15 10:41 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
请问两个质粒在有同源臂在支持重组的菌中进行重组的时候,是线性化质粒重组效率高还是环形质粒重组效率高?暂不考虑后续的筛选过程。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 1 + 2 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1  包包 + 2   查看全部评分

Rank: 1

积分
46 
威望
46  
包包
125  
沙发
发表于 2010-6-17 16:25 |只看该作者
回复 1# hndxws $ g, [/ |8 ]' @

7 B8 T$ D6 m+ _1 r! y$ E; h9 q. G4 K# D9 m) p
# t( u; C$ A* I7 N0 _
细菌内同源重组,因为未线性化的环状质粒之间发生同源重组的几率非常低,所以重组转移载体必须用特定的限制性内切酶进行线性化处理。这种处理的目的:
/ {; \% E! g/ ?' m+ f3 H1 [, ~⑴ 防止随机插入重组时质粒在功能区断开,造成目的基因表达失活;2 v9 n1 e8 k8 D. ^7 C+ A$ M
⑵ 让同源重组以指定的方式发生
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 2

积分
74 
威望
74  
包包
458  
藤椅
发表于 2010-6-17 16:42 |只看该作者
线性化的

Rank: 4

积分
1006 
威望
1006  
包包
3851  

金话筒 优秀会员

板凳
发表于 2010-6-17 23:08 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
环的为什么重组效率低?是因为环的质粒有超螺旋,造成空间效应吗?

Rank: 7Rank: 7Rank: 7

积分
731 
威望
731  
包包
1397  

优秀版主 金话筒 新闻小组成员

报纸
发表于 2010-6-18 15:09 |只看该作者
DSB

Rank: 3Rank: 3

积分
773 
威望
773  
包包
1251  

金话筒 优秀会员

地板
发表于 2010-6-19 10:11 |只看该作者
这个作recombinnering操作的有很多文献 Stewart-RedET.pdf (1.48 MB) 。还有人用ssDNA(单链的)模仿DNA复制时的Okazaki片段实现重组,效率更高 ssDNA-copeland.pdf (105.48 KB)
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 3Rank: 3

积分
773 
威望
773  
包包
1251  

金话筒 优秀会员

7
发表于 2010-6-19 10:12 |只看该作者
是recombineering,上面的拼错了,不好意思。

Rank: 2

积分
118 
威望
118  
包包
43  
8
发表于 2010-6-26 11:31 |只看该作者
回复 6# lixiaodong / ?5 I, w7 h) p! Y" |
: U( w4 P7 R4 H8 i4 w0 B, W
there is a free recombineering system from NIH.

Rank: 3Rank: 3

积分
773 
威望
773  
包包
1251  

金话筒 优秀会员

9
发表于 2010-6-26 15:10 |只看该作者
回复 8# jcb
. |& ~6 K& K4 e2 W; z* t; d5 W! v% o" U" T
Yes, from Neil Copeland's lab at NCI. You can also use the GeneBridge system.
‹ 上一主题|下一主题
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2025-6-11 22:54

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.