两个质粒重组的问题

hndxws

请问两个质粒在有同源臂在支持重组的菌中进行重组的时候，是线性化质粒重组效率高还是环形质粒重组效率高？暂不考虑后续的筛选过程。

zhengds

回复 1# hndxws
$ A3 s6 B) t# j" l
) D: V. E* O' h" e7 g6 J, i
3 ?# E+ s; }( `! G8 o$ x% w' O) f; x5 m
细菌内同源重组，因为未线性化的环状质粒之间发生同源重组的几率非常低，所以重组转移载体必须用特定的限制性内切酶进行线性化处理。这种处理的目的：/ g7 b. A' _5 I8 Y
⑴ 防止随机插入重组时质粒在功能区断开，造成目的基因表达失活；
* v9 a/ N  L) W⑵ 让同源重组以指定的方式发生

gaomei210

线性化的

hndxws

环的为什么重组效率低？是因为环的质粒有超螺旋，造成空间效应吗？

痞子的烟头

DSB

lixiaodong

这个作recombinnering操作的有很多文献 Stewart-RedET.pdf (1.48 MB)

2010-6-19 10:09 上传

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。还有人用ssDNA（单链的）模仿DNA复制时的Okazaki片段实现重组，效率更高 ssDNA-copeland.pdf (105.48 KB)

2010-6-19 10:10 上传

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。

lixiaodong

是recombineering，上面的拼错了，不好意思。

jcb

回复 6# lixiaodong 6 `+ z) Z4 }' ?- V: F4 Q0 e
! u+ L  h# K1 f* Q0 e' ?: h# G
there is a free recombineering system from NIH.

lixiaodong

回复 8# jcb
( ?; i1 j& P; N) |' b- R6 B
8 z* [- f$ ~* A; K4 e4 }* q, |Yes, from Neil Copeland's lab at NCI. You can also use the GeneBridge system.