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[请教] 两个质粒重组的问题 [复制链接]

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楼主
发表于 2010-6-15 10:41 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
请问两个质粒在有同源臂在支持重组的菌中进行重组的时候,是线性化质粒重组效率高还是环形质粒重组效率高?暂不考虑后续的筛选过程。
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沙发
发表于 2010-6-17 16:25 |只看该作者
回复 1# hndxws
$ A3 s6 B) t# j" l
) D: V. E* O' h" e7 g6 J, i
3 ?# E+ s; }( `! G8 o$ x% w' O) f; x5 m
细菌内同源重组,因为未线性化的环状质粒之间发生同源重组的几率非常低,所以重组转移载体必须用特定的限制性内切酶进行线性化处理。这种处理的目的:/ g7 b. A' _5 I8 Y
⑴ 防止随机插入重组时质粒在功能区断开,造成目的基因表达失活;
* v9 a/ N  L) W⑵ 让同源重组以指定的方式发生
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藤椅
发表于 2010-6-17 16:42 |只看该作者
线性化的

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板凳
发表于 2010-6-17 23:08 |只看该作者
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环的为什么重组效率低?是因为环的质粒有超螺旋,造成空间效应吗?

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报纸
发表于 2010-6-18 15:09 |只看该作者
DSB

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地板
发表于 2010-6-19 10:11 |只看该作者
这个作recombinnering操作的有很多文献 Stewart-RedET.pdf (1.48 MB) 。还有人用ssDNA(单链的)模仿DNA复制时的Okazaki片段实现重组,效率更高 ssDNA-copeland.pdf (105.48 KB)
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发表于 2010-6-19 10:12 |只看该作者
是recombineering,上面的拼错了,不好意思。

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发表于 2010-6-26 11:31 |只看该作者
回复 6# lixiaodong 6 `+ z) Z4 }' ?- V: F4 Q0 e
! u+ L  h# K1 f* Q0 e' ?: h# G
there is a free recombineering system from NIH.

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发表于 2010-6-26 15:10 |只看该作者
回复 8# jcb
( ?; i1 j& P; N) |' b- R6 B
8 z* [- f$ ~* A; K4 e4 }* q, |Yes, from Neil Copeland's lab at NCI. You can also use the GeneBridge system.
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