两个质粒重组的问题

hndxws

请问两个质粒在有同源臂在支持重组的菌中进行重组的时候，是线性化质粒重组效率高还是环形质粒重组效率高？暂不考虑后续的筛选过程。

zhengds

回复 1# hndxws $ g, [/ |8 ]' @

7 B8 T$ D6 m+ _1 r! y$ E; h9 q. G4 K# D9 m) p
# t( u; C$ A* I7 N0 _
细菌内同源重组，因为未线性化的环状质粒之间发生同源重组的几率非常低，所以重组转移载体必须用特定的限制性内切酶进行线性化处理。这种处理的目的：
/ {; \% E! g/ ?' m+ f3 H1 [, ~⑴ 防止随机插入重组时质粒在功能区断开，造成目的基因表达失活；2 v9 n1 e8 k8 D. ^7 C+ A$ M
⑵ 让同源重组以指定的方式发生

gaomei210

线性化的

hndxws

环的为什么重组效率低？是因为环的质粒有超螺旋，造成空间效应吗？

痞子的烟头

DSB

lixiaodong

这个作recombinnering操作的有很多文献 Stewart-RedET.pdf (1.48 MB)

2010-6-19 10:09 上传

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。还有人用ssDNA（单链的）模仿DNA复制时的Okazaki片段实现重组，效率更高 ssDNA-copeland.pdf (105.48 KB)

2010-6-19 10:10 上传

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。

lixiaodong

是recombineering，上面的拼错了，不好意思。

jcb

回复 6# lixiaodong / ?5 I, w7 h) p! Y" |
: U( w4 P7 R4 H8 i4 w0 B, W
there is a free recombineering system from NIH.

lixiaodong

回复 8# jcb
. |& ~6 K& K4 e2 W; z* t; d5 W! v% o" U" T
Yes, from Neil Copeland's lab at NCI. You can also use the GeneBridge system.