大鼠BMSCs原代传代后，师姐就说只有成纤维细胞，没有BMSCs

yinxiangyu6666

养大鼠BMSCs一个多月了，原代养的还可以，但传代后，师姐就说只有成纤维细胞，没有BMSCs，这可能吗？
+ x; {. Q0 V# j! \) ?+ i0 X* J求各位大侠帮助啊，没有诱导，直接就都是成纤维细胞？7 X2 h% S( }$ D$ g* J2 _. P
谢谢

shuangor

如果胰酶浓度啊，消化时间控制不好的话，是会出现的
3 s6 k  F# v' G* g8 ]0 ?3 \, v% f% e- d; A$ c
建议胰酶浓度小点，加点PBS稀释一下，消化时间短点，保持活性温度下消化

deshenglll

就是，消化时间短点。

illidancui

请问你师姐是如何判断全是成纤维细胞了，不是形态及其相似么？' n/ ~& _6 r. l- }9 \5 q" i5 @0 K
成纤维细胞消化时间应该比较长吧，不知道各位都是用何种浓度胰酶呃。

yinxiangyu6666

首先谢谢大家，我用的是0.25%的胰酶。师姐告诉我颜色比较深的是BMSCs，成纤维细胞颜色很浅，
7 z! s" K9 a5 e1 f/ E请问各位大侠，BMSCs透光性如何，我传代后的细胞透光性太好了，几乎都看不到。
0 [& j* w3 A# L8 U2 {  A再请教一下，BMSCs是不是轮廓比较清楚，我传代后的细胞轮廓很不明显。
6 G5 C, V5 Q+ G4 W! ]9 \望各位大侠指教！

yinxiangyu6666

回复 2# shuangor 5 t6 x  X$ ?4 @
3 k9 z6 D2 W* p, v8 O

, z) s$ T9 N  g# i: S/ y% e    胰酶应该用多大浓度？消化时间应控制在多长时间合适！
# W$ r0 Y/ o# Q4 t9 Q5 U( P+ ]谢谢

luluegret

请问有图么？" M0 S5 E# h# \: y; y6 ~6 {: I1 J
希望通过图片初步看一下。

yinxiangyu6666

回复 7# luluegret + _" e7 Q1 l, Z3 c) D# a  V
9 A0 W# a# `( a5 V

2 [" L6 W0 T, k% P+ W    我今天是第一次用显微镜的相机，效果不是很好，望大侠见谅，再帮我看看。
8 K6 H7 H  P- J5 V6 v6 x7 s我上传的都是全骨髓法培养SD大鼠BMSCs，原代第八天。2 ^9 `3 ], r: P

yinxiangyu6666

回复 7# luluegret : w$ {9 X6 U# C* r9 ~

2 {2 z& l% Q/ A) M6 |
7 U  B7 g7 _3 Q# [9 w    各位大侠，再请教一下，我今天问的老师，她也是养BMSCs，/ e0 s2 C8 x; [
她告诉我，全骨髓法培养BMSCs中，我们的BMSCs是优势细胞，
- o5 P' E# U  n它会把其他的细胞（包括成纤维细胞）都挤掉，传三代左右，BMSCs
7 R- {) d/ V* B* d就可以达到99%，而且还告诉我，用0.125的胰酶，消化十分钟左右才能
+ a& ~6 @8 d) i0 i8 B# A4 D/ P把贴壁细胞消化下来，岂不是时间也太长了，那样不会影响细胞活性吗？。
0 F% F8 p- F- c9 b+ i; x# O    请教各位大侠，是这样吗？我的印象中是成纤维细胞贴壁牢，BMSCs) ]. k+ J7 ~$ q- e
能把成纤维细胞挤掉吗？

sxjcsq2010

就像你说的那样，成纤维细胞贴壁牢，通过传代的方法，可以逐渐纯化你的目的细胞。但要掌握好传代的条件。