人脂肪干细胞培养问题 求助

hanchao

我提取人乳腺癌旁组织中的脂肪组织的间充质干细胞，接种了6瓶。提取24h后观察，状态很好，有部分细胞贴壁，全量换液。48时后 贴壁的细胞有伸展的状态。但是60h时观察，贴壁细胞全部消失了。培养基内悬浮，怀疑细胞是死亡了。提取了两次都是一样的问题。请问高手，这是怎么了？
$ A' F6 B# S: O  d( }3 k( o初步怀疑 是癌旁组织中的样本不好，但是，不太确定。
6 q: M9 Z' f) S6 T0 d  G再有一个原因就是培养基养分不足，可同组的她提取的是抽脂的脂肪而且用同样的培养基就没有问题。
- e3 M3 y& G% a4 [) @. Q. m我们俩还有一个区别就是我用胰酶和I型胶原酶1：1使用。她全用I型胶原酶消化。会是胰酶的原因吗？我的来源很缺乏啊！来了两次居然都死了。郁闷，呜呜！求助！

sijicc

我的经验，仅供参考。# S9 L/ \% h0 ~6 _8 E
1 别用胰酶  C9 \$ o$ R2 l% H1 O8 b5 @
2 胶原酶消化时间很重要，太久对细胞有损伤，太短，细胞获得率不高，我习惯30分钟，2次消化。( e; e: I; N7 R# h% r5 ]
3 有文献报道，人腹部的脂肪干细胞含量最多。年龄貌似对ADSC也有影响，但这里咱们也别深究了，毕竟取材不容易。
( ~& u+ E2 {; e- o/ c0 \8 Q2 U2 W; ]4 培养液的问题，刚开始做ADSC的时候，我选用了HYCLONE的胎牛血清，后来选用四季青。发现没多大区别。做到最后发现胶原酶消化是首要问题，再次重申。
: ^# f8 t5 B! W/ S5 原代培养时，用6孔板，加大原代细胞的密度，有利于细胞接触，提高存活率。细胞多了再用培养瓶。/ m0 y. w  N8 ?% n$ n; n
6 别郁闷，慢慢来，都是这么过来的。

hanchao

回复 2# sijicc % u- Z9 o- ~+ a1 R8 p+ V8 r

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  很好啊~谢谢你~那个脂肪干细胞含量多少的文献，方便提供给我一份吗？谢谢了。据说HYCOLNE的培养基没有gbico的好~是这样吗？您试过GBICO 的吗？