人脂肪干细胞培养问题 求助

hanchao

我提取人乳腺癌旁组织中的脂肪组织的间充质干细胞，接种了6瓶。提取24h后观察，状态很好，有部分细胞贴壁，全量换液。48时后 贴壁的细胞有伸展的状态。但是60h时观察，贴壁细胞全部消失了。培养基内悬浮，怀疑细胞是死亡了。提取了两次都是一样的问题。请问高手，这是怎么了？
) ^1 M$ u4 r4 R初步怀疑 是癌旁组织中的样本不好，但是，不太确定。
  {' ~! `* O" N& p& ~再有一个原因就是培养基养分不足，可同组的她提取的是抽脂的脂肪而且用同样的培养基就没有问题。" E! {, B  u# g1 m6 E8 R/ J; ?& X$ D
我们俩还有一个区别就是我用胰酶和I型胶原酶1：1使用。她全用I型胶原酶消化。会是胰酶的原因吗？我的来源很缺乏啊！来了两次居然都死了。郁闷，呜呜！求助！

sijicc

我的经验，仅供参考。; _7 ^0 C* H. K
1 别用胰酶
: W; U7 X- A0 e) b1 i; u. U- {2 胶原酶消化时间很重要，太久对细胞有损伤，太短，细胞获得率不高，我习惯30分钟，2次消化。
! x2 ]! j4 N4 D# c8 D# S6 G" w3 有文献报道，人腹部的脂肪干细胞含量最多。年龄貌似对ADSC也有影响，但这里咱们也别深究了，毕竟取材不容易。( U3 Q- w* v% a
4 培养液的问题，刚开始做ADSC的时候，我选用了HYCLONE的胎牛血清，后来选用四季青。发现没多大区别。做到最后发现胶原酶消化是首要问题，再次重申。
- Q  `- f' m8 m5 原代培养时，用6孔板，加大原代细胞的密度，有利于细胞接触，提高存活率。细胞多了再用培养瓶。
# z- K9 k' t! s/ Y' U# t# i: `6 |6 别郁闷，慢慢来，都是这么过来的。

hanchao

回复 2# sijicc 1 N- y$ P( f: s

4 o" T+ [/ ~3 w; S/ G3 A; }2 E# M3 x' A9 Q
  很好啊~谢谢你~那个脂肪干细胞含量多少的文献，方便提供给我一份吗？谢谢了。据说HYCOLNE的培养基没有gbico的好~是这样吗？您试过GBICO 的吗？