求助 有没有哪位高手做过小鼠胚胎干细胞的类胚体的悬浮培养，能给个具体方法不？

mominglily

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我个人认为悬滴是为了干细胞在倒立时重力的作用下更好的聚集成团，形成初步的EB，而当悬滴长到一定程度后（我通常做的是悬滴3天形成初始EB，每个悬滴中基本都能形成一个EB），为了避免悬滴中的EB接触到皿盖或贴壁发生分化或因为滴大过重而掉进皿中的PBS中，我们在3天后将单个EB挑取置入细菌培养皿中悬浮培养，以使EB能够更大空间的接触到营养，促进其进一步长大，待5天后，再将单个EB挑取至24孔板中，进行贴壁诱导培养，这以后EB通过贴壁进而逐步实现分化过程了。10天后，就可以进行后续的提取RNA等进一步的工作了。