求助 有没有哪位高手做过小鼠胚胎干细胞的类胚体的悬浮培养，能给个具体方法不？

future007

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有没有哪位高手做过小鼠胚胎干细胞的类胚体的悬浮培养，能给个具体方法不？小鼠胚胎操作指南中的方法写的有点粗。看的不是很明白，如能赐教，感激不尽。

future007

大家没有人做吗？

iseeyou1210

embryonic body 吗？, H1 ?) m, q# ?0 `
直接用那种做bacteria culture 的petri dish来培养就可以了。

wangzhuo822001

前两天在组织培养皿的内盖上悬滴培养，后三天在细菌培养皿中悬浮培养～一共五天形成拟胚体

future007

想知道更加具体的步骤，例如消化时间和克隆要长到什么状态才能做悬浮培养，再有就是做多大的滴才能保证再翻转DISh的时候不会窜滴。谢谢

future007

悬滴和悬浮有啥区别，希望楼上不要笑话。谢谢

ambassador

其实有改进的方法——即直接悬浮法：通过调整接种细胞的密度（这个就需要摸索）并采用防止细胞贴壁的细菌培养皿，平均可形成150~200个EB球！

wangzhuo822001

详细情况见论坛中embryonic stem cell protocol 这本书～～～直接搜索～～

上海过客

其实有改进的方法——即直接悬浮法：通过调整接种细胞的密度（这个就需要摸索）并采用防止细胞贴壁的细菌培 .../ _8 V; `  A7 G6 g5 W' n& L
ambassador 发表于 2010-7-1 21:42

  }2 S# c( q6 L2 K% ~. `4 A- }! A% Q# x5 y# _$ [3 g
这个 我比较过了 ，似乎直接悬浮的细胞  形成的 EB  ，贴壁率更高 。但是个头比 悬滴的  要 小 。$ s! |. z4 P: B+ L& G5 F# s$ @" E

' X. f. p' J' N% G9 y   向心肌的分化 正在进行中  。

上海过客

想知道更加具体的步骤，例如消化时间和克隆要长到什么状态才能做悬浮培养，再有就是做多大的滴才能保证再翻 ...- b7 X% _) Z$ `4 N" }5 b( E
future007 发表于 2010-7-1 20:58

1 Z2 R0 K. Q6 ~9 L. {

( p5 W5 t1 n3 C8 [: n* O+ c$ l这个绝对是20ul的体积 ，盖子反过来的 时候 慢一点 ，20ul的悬滴 张力还比较大，不会跑的 ，30ul 就会 流走 。     ]! c/ w% I; w& E' q

3 N( |  S% R! D+ Z6 c还有  枪头加 液滴时候，垂直去加，加完以后枪头垂直提出，不要左右动。这样 的液滴 很圆，体积也小 ，每个培养皿加的的液滴更多