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本帖最后由 小白 于 2010-7-15 23:51 编辑 & N' E0 v# r8 N) e
2 w1 o3 z4 I" V8 x4 N u+ y+ w; [3 W具体步骤：
+ {" a" H9 Q% G; }. r1.石蜡切片脱蜡复水，枸橼酸缓冲液热修复，pbs洗3次，每次5分钟, \2 }5 Z% s1 z4 K+ ^& O, D
2.10%普通血清（1小时）或者1%BSA（半小时）封闭
$ {% j, T- i4 {8 i, u3 k6 v5 S2 d ps.两种都试过，结果没有改善
; B! H( }3 B" g$ k3.加用含0.1%TritonX-100、 1%BSA/PBS封闭液稀释的一抗（1：100）
3 n' B, @1 O6 V2 ~0 j1 j5 A J6 M; m 4℃湿盒过夜; v; u. J- @ @+ N- Y" }
4.第二天洗掉一抗，PBS洗3次，每次5min
" @& N' o9 `2 D8 j2 V) y/ u加入用含0.1%TritonX-100、 1%BSA/PBS封闭液稀释的二抗（1：500），室温40min，避光* N! h( r0 z+ C) n& `8 b6 D
5.PBS洗掉二抗，3次，每次5min
3 O, ^& Y* N8 t5 a6.染核，PBS洗3次，每次5min/ g$ r, \- [/ _" _3 F8 i3 P
7.封片，荧光显微镜下观察( E' _4 L0 D/ M
) [! t B% r+ l- b结果背景色很强，阴性对照（一抗换成PBS）也有很强的荧光，一抗是CK系列的抗体。* `, H+ T0 t! P* J- _; k
请教哪些步骤需要改善？ |
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发表于 2010-7-15 23:46
